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中华口腔医学研究杂志(电子版)

中华口腔医学研究杂志(电子版) ›› 2008, Vol. 02 ›› Issue (06) : 558 -563. doi: 10.3877/cma.j.issn.1674-1366.2008.06.003

基础研究

人釉原蛋白真核表达载体体外表达产物生物学活性的检测
赵川江1, 章锦才2,†(), 徐琛蓉2, 张蕴惠3   
  1. 1. 510055 广州，中山大学光华口腔医学院·附属口腔医院·口腔医学研究所
    2. 广东省口腔医院牙周科
    3. 四川大学华西口腔医学院牙周科
  • 收稿日期:2008-07-15 出版日期:2008-12-01
  • 通信作者: 章锦才
  • 基金资助:
    广东省自然科学基金重点资助项目（36946）广东省医学科学研究基金（编号：A2005255）

Experimental study on the effect of expressed products of recombinant plasmid for human amelogenin to promote periodontal regeneration

Chuan-jiang ZHAO1, Jin-cai ZHANG1,†(), Chen-rong XU1, Yun-hui ZHANG1   

  1. 1. Guanghua School of Stomatology， Institute of Stomatological Research， Sun Yat-sen University， Guangzhou 510055， China
  • Received:2008-07-15 Published:2008-12-01
  • Corresponding author: Jin-cai ZHANG
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引用本文：

赵川江, 章锦才, 徐琛蓉, 张蕴惠. 人釉原蛋白真核表达载体体外表达产物生物学活性的检测[J/OL]. 中华口腔医学研究杂志(电子版), 2008, 02(06): 558-563.

Chuan-jiang ZHAO, Jin-cai ZHANG, Chen-rong XU, Yun-hui ZHANG. Experimental study on the effect of expressed products of recombinant plasmid for human amelogenin to promote periodontal regeneration[J/OL]. Chinese Journal of Stomatological Research(Electronic Edition), 2008, 02(06): 558-563.

目的

探讨人釉原蛋白基因重组质粒PcDNA3.1-AMG 的真核细胞转染表达产物是否具有促进牙周组织再生的作用。

方法

脂质体介导PcDNA3.1-AMG 体外转染COS1 细胞，ELISA 法检测转染细胞内及其培养上清液中重组釉原蛋白的表达； 建立犬牙周组织缺损模型， 局部使用转染表达产物冻干粉，8 周后通过组织学观察牙周组织再生的情况。

结果

PcDNA3.1-AMG 转染的COS1 细胞内重组釉原蛋白浓度为（0.253±0.075）μg/ml，培养液中浓度为（0.065±0.011）μg/ml；使用转染表达产物8 周后，牙周缺损区牙骨质、牙槽骨均有显著再生，并且新生牙骨质为有胶原纤维穿通的无细胞牙骨质。

结论

重组质粒PcDNA3.1-AMG 在体外转染哺乳动物细胞后能够表达重组人釉原蛋白，并且表达产物具有促进牙周组织再生的生物学活性。

关键词: 釉原蛋白, 质粒, 引导组织再生, 牙周

Objective

To investigate whether the expressed products of recombinant plasmid PcDNA3.1-AMG for human amelogenin in COS-1 cell lines could promote periodontal regeneration.

Methods

Deliver the recombinant plasmid PcDNA3.1-AMG for human amelogenin to COS-1 cell lines in vitro. Recombinant amelogenin in the transfected cells and cultured supernant were detected by ELISA technique. Buccal dehiscence models were made in dogs， and then the lyophilized cultured supernant of PcDNA3.1-AMG trasfected cells was applied to the defected areas. After 8 weeks， the periodontal regeneration was evaluated by histological methods.

Results

The concentrations of recombinant amelogenin in PcDNA3.1-AMG trasfected cells and cultured supernant were （0.253±0.075） μg/ml and （0.065 ± 0.011） μg/ml respectively. And application of lyophilized expressed products resulted in significant regeneration of acellular cementum with collagenous fibers extending to newly formed alveolar bone.

Conclusions

There is expression of recombinant amelogenin in PcDNA3.1-AMG trasfected COS1 cells. And the expressed products possess the ability to promote periodontal regeneration.

Key words: Amelogenin, Plasmid, Guided tissue regeneration, Periodontal
表1 稳定转染COS-1 细胞后ELISA 法检测重组釉原蛋白表达（μg/ml，±s）
PcDNA3-COS1 PcDNA3AMG-COS1
细胞液 0 0.065±0.011
细胞 0 0.253±0.075
图1 对照组牙骨质和牙槽骨再生均不明显（HE ×10）
图2 实验组牙槽骨、牙骨质和牙周韧带再生（HE ×10）
图3 为图2 方框区域高倍镜下所示，新生牙骨质为无细胞牙骨质，有胶原纤维穿通（HE ×400）
表2 两组新生牙周组织的CT 量化结果（mm，±s）
组别 新生牙槽骨高度 新生牙骨质高度
对照组 0.64±0.08 0.49±0.05
实验组 4.03±0.45* 3.52±0.33*
1
Zeichner-David M. Regeneration of periodontal tissues： cementogenesis revisited. Periodontol 2000， 2006，41：196-217.
2
Casarin RC， Del Peloso Ribeiro E， Nociti FH Jr， et al. A double-blind randomized clinical evaluation of enamel matrix derivative proteins for the treatment of proximal class-Ⅱfurcation involvements. J Clin Periodontol， 2008，35（5）：429-437.
3
Sculean A， Schwarz F， Chiantella GC， et al. Nine-year results following treatment of intrabony periodontal defects with an enamel matrix derivative： report of 26 cases. Int J Periodontics Restorative Dent， 2007，27（3）：221-229
4
章锦才，殷春一，张蕴惠，等. 人釉原蛋白基因的扩增及其真核表达克隆的构建. 四川大学学报（医学版）， 2004，35（1）：8-10.
5
徐琛蓉，杨爱玲，章锦才，等. 猪发育期牙胚釉原蛋白的分离纯化及其多克隆抗体的制备. 华西口腔医学杂志， 2003，21（2）：130-132.
6
Sculean A， Schwarz F， Becker J， et al. The application of an enamel matrix protein derivative （Emdogain） in regenerative periodontal therapy： a review. Med Princ Pract， 2007，16（3）：167-180.
7
Tokajuk G，Pawińska M，Kedra BA. The clinical and radiological assessment of periodontal bone loss treatment using Emdogain. Adv Med Sci， 2006，51 Suppl 1：227-229.
8
Rasperini G，Silvestri M，Ricci G. Long-term clinical observation of treatment of infrabony defects with enamel matrix derivative （Emdogain）：surgical reentry. Int J Periodontics Restorative Dent， 2005，25（2）：121-127.
9
Krebsbach PH， Gu K， Franceschi RT， et al. Gene therapy-directed osteogenesis： BMP-7 trasduced human fibroblasts form bone in vivo.Hum Gene Ther， 2000，11（8）：1201-1210.
[1] 徐松城, 朱曼宁, 叶瑞忠, 王立刚, 侯春杰, 李建春, 孙立涛. 上颌前牙牙周生物型的超声影像特征及相关临床参数测量初步探索[J/OL]. 中华医学超声杂志（电子版）, 2024, 21(01): 53-56.
[2] 陈嘉婷, 杜美君, 石冰, 黄汉尧. 母体系统性疾病对新生儿唇腭裂发生的影响[J/OL]. 中华口腔医学研究杂志(电子版), 2024, 18(04): 262-268.
[3] 杨城, 李祖儿, 刘青, 赵渊, 徐崇燕, 苏军, 张文云. 新型三维复合骨修复支架的制备工艺及其生物学性能[J/OL]. 中华口腔医学研究杂志(电子版), 2024, 18(04): 219-229.
[4] 孙鸿坤, 艾虹, 陈正. 内质网应激介导的牙周炎骨改建失衡的研究进展[J/OL]. 中华口腔医学研究杂志(电子版), 2024, 18(04): 211-218.
[5] 王晓璇, 吴靖, 高雅, 杨栋, 刘欢, 曹正国. 牙周病学分阶段多维立体教学体系在住院医师规范化培训中的探索及应用[J/OL]. 中华口腔医学研究杂志(电子版), 2024, 18(03): 189-194.
[6] 王叶青, 李利彤, 李伟绪, 曹猛. 牙周炎和糖尿病视网膜病变的因果关系：一项双向两样本孟德尔随机化分析[J/OL]. 中华口腔医学研究杂志(电子版), 2024, 18(03): 160-168.
[7] 梁坤, 曾梓涵, 谢力, 于珂, 钟欣楠, 陈业娴, 刘锴, 黄睿洁. 新型烟草制品与传统卷烟对口腔常见疾病的影响研究进展[J/OL]. 中华口腔医学研究杂志(电子版), 2024, 18(02): 137-142.
[8] 罗远杰, 杨靖梅, 孟姝, 敖逸博, 申道南. 槲皮素防治口腔疾病的研究进展[J/OL]. 中华口腔医学研究杂志(电子版), 2024, 18(02): 117-122.
[9] 李琛, 张惟佳, 潘亚萍. 牙周炎与系统性疾病之间关系的应用思考：2022年EFP和WONCA欧洲分部联合研讨会共识报告的解读及启示[J/OL]. 中华口腔医学研究杂志(电子版), 2023, 17(05): 322-327.
[10] 徐燕群, 李平, 杨兴, 薛慧. 脂多糖通过促进透明质酸受体CD44向核转移介导牙周膜细胞白细胞介素6释放[J/OL]. 中华口腔医学研究杂志(电子版), 2023, 17(05): 335-344.
[11] 张潇尹, 于洋. 牙龈卟啉单胞菌介导慢性肾病发生发展的研究进展[J/OL]. 中华口腔医学研究杂志(电子版), 2023, 17(05): 328-334.
[12] 叶弘, 吕婧喆, 钟良军. 白藜芦醇治疗牙周炎和糖尿病的新进展[J/OL]. 中华口腔医学研究杂志(电子版), 2023, 17(05): 376-380.
[13] 李彦浇, 梁雷, 金钫, 王智伟. 银杏内酯B通过调控miR-24-3p对人牙周膜干细胞增殖、成骨分化的影响[J/OL]. 中华细胞与干细胞杂志(电子版), 2024, 14(04): 229-235.
[14] 周倩妹, 王宪娥, 徐筱, 老慧琳, 赵欣悦, 胡菁颖. 多元化系统护理对老年人群牙周健康指标影响的系统评价[J/OL]. 中华临床医师杂志(电子版), 2024, 18(05): 500-506.
[15] 周艳, 赵梦扬, 乔彤, 蔡颖. 人工智能辅助口腔环境管理模式在颈动脉狭窄合并牙周炎患者中的应用研究[J/OL]. 中华脑血管病杂志(电子版), 2024, 18(06): 528-534.
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