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中华口腔医学研究杂志(电子版)

中华口腔医学研究杂志(电子版) ›› 2013, Vol. 07 ›› Issue (02) : 94 -99. doi: 10.3877/cma.j.issn.1674-1366.2013.02.003

基础研究

OCT4B1 在牙髓细胞的表达及其对凋亡相关因子的调控作用
黄蓉1, 刘路1, 韦曦1,†()   
  1. 1. 510055 广州，中山大学光华口腔医学院·附属口腔医院，广东省口腔医学重点实验室
  • 收稿日期:2012-11-28 出版日期:2013-04-01
  • 通信作者: 韦曦
  • 基金资助:
    国家自然科学基金(81070830)广东省科技计划(2010B031600063)广东省医学科研基金(B2012141)

The expression of OCT4B1 in human dentalp pulp cells and its effect on apoptosis related factors

Rong HUANG1, Lu LIU1, Xi WEI1,†()   

  1. 1. Guanghua School of Stomatology，Hospital of Stomatology，Sun Yatsen University，Guangdong Provincial Key Laboratory of Stomatology，Guangzhou 510055，China
  • Received:2012-11-28 Published:2013-04-01
  • Corresponding author: Xi WEI
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引用本文：

黄蓉, 刘路, 韦曦. OCT4B1 在牙髓细胞的表达及其对凋亡相关因子的调控作用[J/OL]. 中华口腔医学研究杂志(电子版), 2013, 07(02): 94-99.

Rong HUANG, Lu LIU, Xi WEI. The expression of OCT4B1 in human dentalp pulp cells and its effect on apoptosis related factors[J/OL]. Chinese Journal of Stomatological Research(Electronic Edition), 2013, 07(02): 94-99.

目的

研究人牙髓细胞（HDPCs）中八聚体转录结合因子4 剪接异构体B1（OCT4B1）的表达及基因转染OCT4B1 后对凋亡相关因子的影响。

方法

实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）和荧光原位杂交（FISH）技术检测正常HDPCs 中OCT4B1 的表达；利用慢病毒载体构建OCT4B1 高表达模型并转染HDPCs，检测半胱氨酸天冬氨酸特异蛋白酶（Caspase）3 和7 的表达变化。

结果

OCT4B1 表达于正常HDPCs 且在第三代中表达最高；上调OCT4B1 后与空载体组相比，OCT4B1 高表达组Caspase-3、Caspase-7 mRNA 表达降低（P＜0.05）。

结论

HDPCs 中上调OCT4B1 可抑制Caspase-3和Caspase-7 的表达，说明OCT4B1 参与细胞应激反应，可能与细胞凋亡相关。

关键词: 牙髓细胞, 八聚体转录结合因子4 剪接异构体B1, 半胱氨酸天冬氨酸特异蛋白酶3, 半胱氨酸天冬氨酸特异蛋白酶7

Objective

This study was to investigate the expression of OCT4B1 in human dental pulp cells （HDPCs） and its effect on apoptosis related factors.

Methods

The expression of OCT4B1 in normal HDPCs was detected by real-time quantitative PCR and fluorescence in situ hybridization（FISH）. The overexpression model of OCT4B1 was constructed with lentivirus. The expression of Caspase-3 and Caspase-7 was examined after transfection.

Results

OCT4 splicing variants were expressed in normal HDPCs and the expression peaked at passage 3. Compared with the group transfected with the lentiviral vector，the expression of Caspase-3 and Caspase-7 mRNA of the OCT4B1 overexpression group decreased after the transfection （P＜ 0.05）.

Conclusions

Up-regulation of OCT4B1 in HDPCs caused inhibition of Caspase-3 and Caspase-7. Thus，OCT4B1 may be involved in cellular stress and play a essential role in apoptosis.

Key words: Dental pulp cells, Octamer-binding transcription factor 4B1, Caspase-3, Caspase-7
表1 实时荧光定量PCR 引物序列
基因 引物序列
OCT4A Forward：5'-CACCTGGCTTCGGATTTCG-3'
Reverse：5'-ACTCCTGCTTCGCCCTCA-3'
OCT4B Forward：5'-GGGGAAGAGTAGTCCTTTGTTA-3'
Reverse：5'-GGAATAGTCTGTAGAAGTGCCT-3'
OCT4B1 Forward：5'-GGGTTCTATTTGGTG GGTTCC-3'
Reverse：5'-TCCCTCTCCCTACTCCTCTTCA-3'
Caspase-3 Forward：5'-TGCTATTGTGAGGCGGTTGT-3'
Reverse：5'-TCACGGCCTGGGATTTCAAG-3'
Caspase-7 Forward：5'-CGCGGGCTCAACTTTGTAGA-3'
Reverse：5'-TTGCTGAATCCTCAACCCCC-3'
β-actin Forward：5'-TCCCTCTCCCTACTCCTCTTCA-3'
Reverse：5'-TCGTCCCAGTTGGTGACGAT-3'
图1 OCT4 各剪接异构体在牙髓细胞的表达 OCT4A、OCT4B、OCT4B1 mRNA 在不同代数牙髓细胞的表达呈现相似趋势。 从P1 至P3 表达量升高，P3 达最高，随后随细胞传代表达降低（P＜0.05）
图2 OCT4B1 在牙髓细胞的FISH 检测（× 400） 图A ～C 为使用FISH 探针组；图D ～F 组为阴性对照组，未加入荧光探针。 图A、D 为DAPI 染色，呈蓝色荧光；图B 为OCT4B1 的FISH 探针检测，可见染色较浅的星点状绿色荧光，说明OCT4B1 在细胞质中呈弱阳性表达；图E 为阴性对照组，未见绿色荧光；图C、F 为融合图片
图3 质粒PCR 及转染效率检测 A：质粒PCR 鉴定，可见500 bp 大小目的条带；B：转染后牙髓细胞明场图像（ × 100）；C：绿色荧光激发后牙髓细胞图像（ × 100）
图4 OCT4 各剪接异构体及凋亡相关因子的表达改变 慢病毒转染牙髓细胞后，与空载组比较，OCT4B1 高表达组OCT4A mRNA 无明显改变，OCT4B mRNA 表达升高约15 倍，OCT4B1 mRNA 表达升高约20 倍，Caspase-3、Caspase-7 mRNA 表达量降低（aP＜0.05）
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