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中华口腔医学研究杂志(电子版) ›› 2012, Vol. 6 ›› Issue (03) : 272 -275. doi: 10.3877/cma.j.issn.1674-1366.2012.03.009

基础研究

牙本质内Ⅰ型胶原纤维形态的免疫标记初探
肖玉鸿1, 胡琳2, 方明3, 黄鹂3, 贾安琦1, 陈吉华3,()   
  1. 1.650032 昆明,成都军区昆明总医院口腔科
    2.650032 第二炮兵清河门诊部口腔科
    3.650032 第四军医大学口腔医学院修复科
  • 收稿日期:2011-12-28 出版日期:2012-06-01
  • 通信作者: 陈吉华
  • 基金资助:
    国家自然科学基金(30973356、81130078)

Preliminary research on immune labelling of typeⅠcollagen fibril in dentin

Yu-hong XIAO1, Lin HU1, Ming FANG1, Li HUANG1, An-qi JIA1, Ji-hua CHEN1,()   

  1. 1.Department of Stomatology, Kunming General Hospital of Chengdou Military Commond, Kunming 650032, China
  • Received:2011-12-28 Published:2012-06-01
  • Corresponding author: Ji-hua CHEN
引用本文:

肖玉鸿, 胡琳, 方明, 黄鹂, 贾安琦, 陈吉华. 牙本质内Ⅰ型胶原纤维形态的免疫标记初探[J/OL]. 中华口腔医学研究杂志(电子版), 2012, 6(03): 272-275.

Yu-hong XIAO, Lin HU, Ming FANG, Li HUANG, An-qi JIA, Ji-hua CHEN. Preliminary research on immune labelling of typeⅠcollagen fibril in dentin[J/OL]. Chinese Journal of Stomatological Research(Electronic Edition), 2012, 6(03): 272-275.

目的

初步探讨进行免疫标记的牙本质脱矿后暴露的Ⅰ型胶原纤维。

方法

利用免疫组化技术和场发射扫描电镜(FEISEM)相结合,对暴露胶原纤维的形态以及结构完整性进行评价。

结果

通过FEISEM 观察,牙本质脱矿后暴露的Ⅰ型胶原纤维,可以结合抗Ⅰ型胶原单克隆抗体以及胶体金标记的相应二抗,胶体金标记颗粒分布均匀,可与暴露的胶原纤维上的抗原表位相结合,实现免疫定位。

结论

免疫组化技术和FEISEM 相结合,可以直观观察胶原纤维立体网络的超微结构,是一种准确的、可复制的、可行的方法。

Objective

This study was designed to evaluate the morphology of type Ⅰcollagen in demineralized dentin using an immunocytochemical technique.

Methods

After dentin was etched with 37% phosphoric acid gel for 15 s, a double immune labeling procedure was applied, and then the morphological and structural integrity evaluation of exposed collagen fibril was carried out under a field emission in-lens scanning electron microscope (FEISEM).

Results

TypeⅠcollagen was labeled with secondary antibodies conjugated with 20 nm colloidal gold particles. The intense and uniform labeling signal was detected on the major fibrils indicating that the anti-typeⅠcollagen antibody could bind with favorable interaction sites on the exposed type Ⅰ collagen molecular surface.

Conclusions

The ultrastructure of three-dimensional collagen fibril network could be identified by immunocytochemistry technology under FEISEM observation, which represented an accurate, reproducible and feasible method.

图1 处理组1 免疫标记后场发射扫描电镜照片(×20 000) 可见完全去除玷污层,胶原纤维清晰暴露,胶体金颗粒标记于暴露的胶原纤维上
图2 处理组1 局部区域放大后,胶体金颗粒均匀分布于主纤维上(×50 000)
图3 处理组1 胶原纤维之间的空间关系清晰可见(×100 000)
图4 处理组1 胶原纤维形态结构完整,可见纤维典型条带,胶体金颗粒与胶原纤维的抗原表位相结合(×200 000)
图5 处理组2 二抗标记后场发射扫描电镜照片(×50 000)试件表面玷污层已完全去除,胶原纤维清晰暴露,但未见胶体金标记颗粒
图6 处理组3 免疫标记场发射扫描电镜照片(×50 000)玷污层已完全去除,胶原纤维塌陷,未见胶体金标记颗粒
图7 对照组免疫标记后场发射扫描电镜照片(×20 000)可见试件表面覆盖大量玷污层,未见胶体金标记颗粒
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