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中华口腔医学研究杂志(电子版)

中华口腔医学研究杂志(电子版) ›› 2021, Vol. 15 ›› Issue (06) : 333 -340. doi: 10.3877/cma.j.issn.1674-1366.2021.06.002

基础研究

Toll样受体9和环氧合酶2在口腔鳞状细胞癌及癌旁组织中的表达意义
李众1, 姚小武1,†(), 陈仕生1, 卢子正1, 林敏校1, 桂心伟1   
  1. 1. 汕头大学医学院第二附属医院口腔科　515041
  • 收稿日期:2021-10-03 出版日期:2021-12-01
  • 通信作者: 姚小武

Expressions of TLR9 and COX-2 in oral squamous cell carcinoma and paracancerous tissues and their significance

Zhong Li1, Xiaowu Yao1,†(), Shisheng Chen1, Zizheng Lu1, Minxiao Lin1, Xinwei Gui1   

  1. 1. Department of Stomatology, The Second Affiliated Hospital, Medical College of Shantou University, Shantou 515041, China
  • Received:2021-10-03 Published:2021-12-01
  • Corresponding author: Xiaowu Yao
  • Supported by:
    Science and Technology Special Fund of Guangdong Province (Large Special Project + Task List)(2020-127); 2017 Medical and Health Technology Plan of Shantou(〔2018〕No.11)
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引用本文：

李众, 姚小武, 陈仕生, 卢子正, 林敏校, 桂心伟. Toll样受体9和环氧合酶2在口腔鳞状细胞癌及癌旁组织中的表达意义[J]. 中华口腔医学研究杂志(电子版), 2021, 15(06): 333-340.

Zhong Li, Xiaowu Yao, Shisheng Chen, Zizheng Lu, Minxiao Lin, Xinwei Gui. Expressions of TLR9 and COX-2 in oral squamous cell carcinoma and paracancerous tissues and their significance[J]. Chinese Journal of Stomatological Research(Electronic Edition), 2021, 15(06): 333-340.

目的

探讨Toll样受体9（TLR9）和环氧合酶2（COX-2）在口腔鳞状细胞癌（OSCC）及其癌旁组织中的表达和意义。

方法

选择OSCC患者36例，切取OSCC组织和肿瘤边界外约5 mm的癌旁组织，采用免疫组织化学法检测其中TLR9和COX-2蛋白的表达，与18例正常口腔黏膜组织对比分析。采用图像分析Image J软件对3种组织照片进行分析，计算平均吸光度（A）值；采用双评分半定量法分析3种组织切片染色强度。多组平均A值比较采用单因素方差分析，组内两两比较采用LSD-t检验；3种组织间免疫组化染色阳性率的比较采用卡方检验或Fisher精确概率法，TLR9与COX-2在OSCC组织及癌旁组织中表达的相关性分析采用Spearman法。

结果

OSCC组织的TLR9阳性细胞的平均A值为0.19 ± 0.06，癌旁组织为0.18 ± 0.05，正常组织为0.13 ± 0.04，3种组织切片间差异具有统计学意义（F = 8.022，P = 0.001），OSCC组织与癌旁组织均高于正常组织（tOSCC = 3.99，POSCC<0.001；t癌旁组织 = 2.88，P癌旁组织 = 0.005）。OSCC组织COX-2阳性细胞的平均A值为0.20 ± 0.06，癌旁组织为0.18 ± 0.05，正常组织为0.14 ± 0.04，3种组织切片间差异具有统计学意义（F=7.716，P = 0.01），COX-2在OSCC组织中表达高于癌旁组织（t = 2.00，P = 0.048），在OSCC组织及癌旁组织中表达均高于正常组织，差异具有统计学意义（tOSCC = 3.90，POSCC<0.001；t癌旁组织 = 2.25，P癌旁组织 = 0.027）。TLR9与COX-2在3种组织中表达阳性率差异有统计学意义（χ2TLR9 = 45.280，PTLR9<0.001；χ2COX-2 = 30.972，PCOX-2<0.001），癌组织和癌旁组织的TLR9阳性率均高于正常黏膜组织，差异具有统计学意义（χ2OSCC = 30.375，POSCC<0.001；χ2癌旁组织 = 30.375，P癌旁组织<0.001）；癌组织和癌旁组织的COX-2阳性率高于正常黏膜组织，差异具有统计学意义（χ2OSCC = 23.336，POSCC<0.001；χ2癌旁组织 = 17.763，P癌旁组织<0.001）。TLR9和COX-2在OSCC组织及癌旁组织中的表达有相关性（rOSCC = 0.804，POSCC<0.001；r癌旁组织 = 0.533，P癌旁组织 = 0.001）。

结论

TLR9和COX-2在OSCC及癌旁组织中表达升高，TLR9可能通过调控其下游信号分子COX-2在OSCC的发生、发展中发挥重要作用。

关键词: 外科，口腔, 癌，鳞状细胞, 免疫组织化学, Toll样受体9, 环氧合酶2
Objective

To investigate the expression and significance of Toll-like receptor 9 (TLR9) and cyclooxygenase 2 (COX-2) in oral squamous cell carcinoma (OSCC) and paracancerous tissues.

Methods

A total of thirty-six patients with OSCC were selected, in which OSCC tissues and paracancerous tissues about 5 mm beyond the tumor boundary were obtained. The expression of TLR9 and COX-2 protein were detected by immunohistochemistry, and compared with 18 normal oral mucosa tissues. Image analysis was done to analyze the photos of the three kinds of tissues to calculate the average absorbance (A) value. The double-scoring semi-quantitative method was used to analyze the staining intensity of the specimens. The absorbance values of multiple groups were compared by One-Way analysis of variance, and the pairwise comparisons within the groups were done by LSD-t test; the positive rate of immunohistochemical staining among the three kinds of tissues was compared by chi-square test or Fisher′s exact probability method. The Spearman method was used to analyze the correlation of TLR9 and COX-2 expression in OSCC tissues and paracancerous tissues.

Results

The average absorbance (A) values of TLR9 positive cells in OSCC, the paracancerous and normal tissues were 0.19 ± 0.06, 0.18 ± 0.05 and 0.13 ± 0.04, respectively, which was significant different (F = 8.022, P = 0.001) . Specifically, the average absorbance values of OSCC and paracancerous tissues were higher than that of normal oral mucosa tissues (tOSCC = 3.99, POSCC<0.001, tparacancerous tissues = 2.88, Pparacancerous tissues = 0.005) . The average A values of COX-2 positive cells in OSCC, the paracancerous and normal tissues were 0.20 ± 0.06, 0.18 ± 0.05 and 0.14 ± 0.04, respectively, which wassignificantly different (F = 7.716, P = 0.01) . The expression of COX-2 in OSCC tissue was higher than that in the paracancerous tissues (t = 2.00, P = 0.048) , and the expression of COX-2 in both OSCC and paracancerous tissues was higher than that in the normal oral mucosa tissues, which was statistically different (tOSCC = 3.90, POSCC<0.001; tparacancerous tissue = 2.25, Pparacancerous tissue = 0.027) . The positive rates of TLR9 and COX-2 in the three kinds of tissues were significantly different (χ2TLR9 = 45.280, PTLR9<0.001; χ2COX-2 = 30.972, PCOX-2<0.001) . The positive rate of TLR9 in the cancerous and paracancerous tissues was higher than that of the normal oral mucosa tissues, and the difference is statistically significant (χ2OSCC = 30.375, POSCC<0.001; χ2paracancerous tissues=30.375, Pparacancerous tissues<0.001) .The positive rate of COX-2 in the cancerous and paracancerous tissues was higher than that in the normal oral mucosa tissues, which was statistically different (χ2OSCC = 23.336, POSCC<0.001; χ2paracancerous tissues = 17.763, Pparacancerous tissues<0.001) . The expressions of TLR9 and COX-2 in OSCC and paracancerous tissues were correlated (rOSCC = 0.804, POSCC<0.001; rparacancerous tissues = 0.533, Pparacancerous tissues = 0.001) .

Conclusions

TLR9 and COX-2 were highly expressed in OSCC and paracancerous tissues. TLR9 may play an important role in the occurrence and development of OSCC by regulating its downstream signal molecule COX-2.

Key words: Surgery, oral, Carcinoma, squamous cell, Immunohistochemistry, Toll-like receptor 9, Cyclooxygenase 2
图1 环氧合酶2（COX-2）在不同口腔黏膜组织中的表达情况（免疫组化染色，A、B、C为低倍放大，D、E、F为高倍放大）A：正常口腔黏膜组织，胞核不着色，胞质少见着色；B：癌旁组织，胞质大部分着色；C：口腔鳞状细胞癌组织，胞核、胞质均有着色；D：正常口腔黏膜组织，细胞形态一致，胞核大小均匀；E：癌旁组织，细胞形态基本正常，排列少许凌乱；F：口腔鳞状细胞癌组织，癌细胞形成癌巢，可见角化珠，细胞核形态大小不一，排列紊乱。
图2 Toll样受体9（TLR9）在不同口腔黏膜组织中的表达情况（免疫组化染色，A、B、C为低倍放大，D、E、F为高倍放大）A：正常口腔黏膜组织，胞核胞质均不着色；B：癌旁组织，部分胞质着色；C：口腔鳞状细胞癌组织，胞质大部分着色，胞核少见着色；D：正常口腔黏膜组织，细胞形态正常，胞核大小均匀；E：癌旁组织，细胞形态基本正常；可见部分不典型增生；F：口腔鳞状细胞癌组织，细胞形态不规则，细胞核增大，排列紊乱，部分见核分裂。
表1 Toll样受体9（TLR9）与环氧合酶2（COX-2）在不同口腔黏膜组织中的平均吸光度（A）值结果
组别 样本数 TLR9 COX-2
口腔鳞状细胞癌 36 0.19 ± 0.06 0.20 ± 0.06
癌旁组织 36 0.18 ± 0.05 0.18 ± 0.05
正常黏膜组织 18 0.13 ± 0.04 0.14 ± 0.04
表2 Toll样受体9（TLR9）与环氧合酶2（COX-2）在不同口腔黏膜组织中免疫组化阳性细胞的等级评分结果
组别 样本数 TLR9 COX-2
（-） （+） （++） （+++） （-） （+） （++） （+++）
口腔鳞状细胞癌 36 3 6 13 14 2 7 8 19
癌旁组织 36 3 9 14 10 4 9 13 10
正常黏膜组织 18 15 2 1 0 12 5 1 0
表3 Toll样受体9（TLR9）与环氧合酶2（COX-2）在口腔鳞状细胞癌（OSCC）中阳性表达的相关性分析结果
COX-2 TLR9 总计 r值 P值
阴性 阳性
阴性 2 1 3 0.804 0.001
阳性 0 33 33
总计 2 34 36    
表4 Toll样受体9（TLR9）与环氧合酶2（COX-2）在癌旁组织中阳性表达的相关性分析结果
COX-2 TLR9 总计 r值 P值
阴性 阳性
阴性 2 1 3 0.533 0.001
阳性 2 31 33
总计 4 32 36    
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