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中华口腔医学研究杂志(电子版)

中华口腔医学研究杂志(电子版) ›› 2018, Vol. 12 ›› Issue (01) : 8 -13. doi: 10.3877/cma.j.issn.1674-1366.2018.01.002

所属专题： 文献；

基础研究

季铵盐包裹溴化银纳米复合物对基质金属蛋白酶活性的影响
胡运通1, 黄芳1, 陈银燕1, 张瑜1, 肖玉鸿1,†()   
  1. 1. 650032　昆明，成都军区昆明总医院口腔科，昆明医科大学教学医院
  • 收稿日期:2018-01-01 出版日期:2018-02-01
  • 通信作者: 肖玉鸿
  • 基金资助:
    国家自然科学基金(81460107)

The effect of AgBr/cationic polymer nanocomposite on matrix metalloproteinase activities

Yuntong Hu1, Fang Huang1, Yinyan Chen1, Yu Zhang1, Yuhong Xiao1,†()   

  1. 1. Department of Stomatology, Kunming General Hospital of Chengdu Military Command, Teaching Hospital of Kunming Medical University, Kunming 650032, China
  • Received:2018-01-01 Published:2018-02-01
  • Corresponding author: Yuhong Xiao
  • About author:
    Corresponding author:Xiao Yuhong,Email:
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引用本文：

胡运通, 黄芳, 陈银燕, 张瑜, 肖玉鸿. 季铵盐包裹溴化银纳米复合物对基质金属蛋白酶活性的影响[J/OL]. 中华口腔医学研究杂志(电子版), 2018, 12(01): 8-13.

Yuntong Hu, Fang Huang, Yinyan Chen, Yu Zhang, Yuhong Xiao. The effect of AgBr/cationic polymer nanocomposite on matrix metalloproteinase activities[J/OL]. Chinese Journal of Stomatological Research(Electronic Edition), 2018, 12(01): 8-13.

目的

研究季铵盐包裹溴化银纳米复合物（AgBr/BHPVP）对牙本质基质金属蛋白酶（MMP）活性的影响。

方法

采用比色试剂盒检测浓度为0.5% ~ 1.5% AgBr/BHPVP对游离型重组人基质金属蛋白酶rhMMP-2、rhMMP-8、rhMMP-9活性的影响。将脱矿的牙本质经0.2%氯己定（CHX）或不同浓度AgBr/BHPVP处理，分别在第3、5、7天测定释放Ⅰ型胶原吡啶交联终肽（ICTP）水平和第30天时测量牙本质条干重损失量，以及使用明胶酶谱法检测对牙源性明胶酶MMP-2、MMP-9活性的影响，用以评估AgBr/BHPVP对结合型MMP活性的影响。采用单因素方差（One-Way ANOVA）分析各处理组rhMMP活性以及各处理组牙本质条干重损失量总体差异，使用重复测量方差分析各处理组在不同时间点对ICTP释放水平的影响，Tukey检验进行组间两两对比。

结果

检测浓度AgBr/BHPVP对游离型MMP均具有明显的抑制作用，浓度达1.5%时对rhMMP-2、rhMMP-8、rhMMP-9活性抑制接近90%。ICTP释放量在7 d时，AgBr/BHPVP组<CHX组<空白组，差异有统计学意义（F= 65.389，P<0.001）；相比空白组牙本质条干重损失百分比（16.34 ± 3.60）%，1.5% AgBr/BHPVP组损失最少（4.30 ± 0.98）%，各组差异有统计学意义（F = 48.564，P<0.001）；明胶酶谱中除AgBr组外，其余组对明胶酶均有明显抑制效果。

结论

适量浓度AgBr/BHPVP对游离型rhMMP和结合型MMP活性具有明显的抑制作用，具有进一步运用于牙科材料提高牙本质粘接性能的前景。

关键词: 季铵类化合物, 基质金属蛋白酶类, 酶抑制剂, 溴化物，银化合物
Objective

This study was aimed to evaluate the effects of AgBr/cationic polymer nanocomposite (AgBr/BHPVP) on dentin matrix metalloproteinase (MMPs) .

Methods

Inactivation effects of AgBr/BHPVP at different concentrations on soluble recombinant human MMPs (rhMMPs) were evaluated using a colorimetric assay kit. Matrix-bound endogenous MMPs activity was evaluated via dry mass loss and C-terminal cross-linked telopeptide (ICTP) release of demineralized human dentin. Demineralized dentin beams or powder were respectively pretreated with 0.2% chlorhexidine (CHX) or AgBr/BHPVP at different mass%. Changes in ICTP release were examined after 3, 5 and 7 days, and loss of dry mass was measured after 30 days. Besides this, gelatin zymography was also used to evaluate the effects of different pretreated groups on MMP-2 and MMP-9. One-Way ANOVA test was applied to analyze the overall difference of inactivation function on rhMMPs and dry mass loss in each group. Repeated measures ANOVA was used to analyze the effects of time on the ICTP release in different groups, while Tukey′s test was used for the comparison between every two groups.

Results

AgBr/BHPVP exhibited inactivation function on soluble MMPs, with about 90% of inhibition on rhMMP-2, rhMMP-8 and rhMMP-9 at 1.5% AgBr/BHPVP concentration. Compared with control group and CHX group, AgBr/BHPVP pretreated demineralized dentin exhibited the lowest ICTP release after 7 days (F= 65.389, P<0.001) . Dentine beams incubated in 1.5% AgBr/BHPVP showed only (4.3 ± 0.98) % loss of dry mass vs. (16.34 ± 3.60) % loss for control. Except for AgBr group, other pretreated groups had obvious inhibition on gelatinase activity in gelatin zymography.

Conclusions

A moderate amount of AgBr/BHPVP is effective in inhibiting both soluble and matrix-bound MMPs. AgBr/BHPVP may have the potential to be used in dental materials and improve the resin-dentin bonding durability.

Key words: Quaternary ammonium compounds, Matrix metalloproteinase, Enzyme inhibitors, Bromides, Silver compounds
图1 季铵盐包裹溴化银纳米复合物（AgBr/BHPVP）结构图
表1 游离型基质金属蛋白酶实验分组
组别 成分
阳性组 MMP+显色底物
实验组 MMP+不同浓度AgBr/BHPVP+显色底物
抑制组 MMP+GM6001（试剂盒内提供的MMP抑制剂）+显色底物
载体对照组 待测试剂+显色底物
底物组 缓冲液+显色底物
表2 结合型基质金属蛋白酶实验分组
组别 成分
空白组 脱矿牙本质+人工唾液
抑制组 脱矿牙本质+含0.2% CHX人工唾液
实验组 脱矿牙本质+含不同浓度AgBr/BHPVP人工唾液
图2 季铵盐包裹溴化银纳米复合物（AgBr/BHPVP）对游离型基质金属蛋白酶（MMP）活性抑制率（%）
表3 不同处理组脱矿牙本质在不同时间Ⅰ型胶原吡啶交联终肽释放浓度（ng/mL， ± s）
组别 重复组数 3 d 5d 7d
空白组 3 1.40 ± 0.13ae 2.15 ± 0.06af 2.42 ± 0.14ag
抑制组 3 1.45 ± 0.11ae 1.44 ± 0.20be 1.64 ± 0.10be
0.5% AgBr/BHPVP组 3 1.19 ± 0.09be 1.42 ± 0.14bf 1.24 ± 0.09cef
1.0% AgBr/BHPVP组 3 1.10 ± 0.11be 1.20 ± 0.18bce 1.14 ± 0.09cde
1.5% AgBr/BHPVP组 3 1.43 ± 0.11ae 1.04 ± 0.08cf 0.95 ± 0.18df
图3 不同处理组脱矿牙本质在不同时间Ⅰ型胶原吡啶交联终肽释放浓度
图4 明胶酶谱法检测不同处理组对牙源性明胶酶活性影响
图5 经30 d培养后不同处理组牙本质条干重损失百分比情况
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