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中华口腔医学研究杂志(电子版)

中华口腔医学研究杂志(电子版) ›› 2017, Vol. 11 ›› Issue (02) : 86 -92. doi: 10.3877/cma.j.issn.1674-1366.2017.02.004

所属专题： 文献；

基础研究

miR-362-5p靶向DKK1促进舌鳞状细胞癌细胞增殖和侵袭
周媛1, 唐海阔2,†(), 胡飚3   
  1. 1. 510060　广州市第八人民医院口腔科
    2. 510055　广州，中山大学光华口腔医学院·附属口腔医院，广东省口腔医学重点实验室
    3. 510220　广州市海珠区口腔医院
  • 收稿日期:2016-11-04 出版日期:2017-04-01
  • 通信作者: 唐海阔

miR-362-5p targets DKK1 and promotes the proliferation and invasion in tongue squamous cell carcinoma

Yuan Zhou1, Haikuo Tang2,†(), Biao Hu3   

  1. 1. The Eighth People′s Hospital of Guangzhou, Guangzhou 510060, China
    2. Guanghua School of Stomatology, Hospital of Stomatology, Sun Yat-sen University, Guangdong Provincial Key Laboratory of Stomatology, Guangzhou 510055, China
    3. Stomatological Hospital of Haizhu District, Guangzhou 510220, China
  • Received:2016-11-04 Published:2017-04-01
  • Corresponding author: Haikuo Tang
  • About author:
    Corresponding author: Tang Haikuo, Email:
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引用本文：

周媛, 唐海阔, 胡飚. miR-362-5p靶向DKK1促进舌鳞状细胞癌细胞增殖和侵袭[J/OL]. 中华口腔医学研究杂志(电子版), 2017, 11(02): 86-92.

Yuan Zhou, Haikuo Tang, Biao Hu. miR-362-5p targets DKK1 and promotes the proliferation and invasion in tongue squamous cell carcinoma[J/OL]. Chinese Journal of Stomatological Research(Electronic Edition), 2017, 11(02): 86-92.

目的

检测miR-362-5p在人舌鳞状细胞癌（TSCC）组织及细胞系中的表达，探讨miR-362-5p对TSCC细胞增殖和侵袭能力的影响，及其可能的作用机制。

方法

利用实时定量聚合酶链反应（PCR）技术检测TSCC组织及细胞系中miR-362-5p的表达水平；将miR-362-5p mimic、antagomiR-362-5p和阴性对照组分别转入人TSCC细胞SCC-9和UM1中，采用细胞计数试剂盒（CCK-8）以及Transwell法检测转染后各组细胞增殖及侵袭能力的改变，蛋白印迹法（Western blot）以及TOP/FOP双荧光报告检测Wnt信号通路活性。两组间均数的比较采用Student′s t检验，P<0.05为差异具有统计学意义。

结果

相对于正常舌黏膜组织及细胞，TSCC组织和细胞系中miR-362-5p的表达水平显著上调（P<0.001）。SCC-9和UM1细胞中转染antagomiR-362-5p或miR-362-5p mimic能显著抑制（tSCC-9=26.53，PSCC-9=0.0083；tUM1=24.45，PUM1=0.0094）或上调（tSCC-9=-257.87，PSCC-9=0.0008；tUM1=-270.44，PUM1= 0.0007）miR-362-5p表达水平。下调miR-362-5p表达能降低SCC-9和UM1细胞的增殖（tSCC-9= 32.44，PSCC-9= 0.0009；tUM1= 22.32，PUM1= 0.0013）和侵袭能力（tSCC-9= 39.55，PSCC-9= 0.0008；tUM1= 23.78，PUM1= 0.0092），而上调其表达则可增强细胞的增殖（tSCC-9=-23.35，PSCC-9= 0.0084；tUM1=-17.47，PUM1= 0.0138）和侵袭能力（tSCC-9=-26.23，PSCC-9= 0.0072；tUM1=-18.69，PUM1= 0.0145）。同时，miR-362-5p能够负性调控Dickkopf1（DKK1）的表达，增强Wnt/β-catenin信号通路。

结论

TSCC组织及细胞系中miR-362-5p的表达上调，其可能通过抑制DKK1表达增强Wnt/β-catenin信号通路，促进TSCC细胞的增殖和侵袭。

关键词: 癌，鳞状细胞, 舌, 肿瘤侵润, miR-362-5p, DKK1, Wnt/β-catenin信号通路
Objective

To investigate the expression level of miR-362-5p in tongue squamous cell carcinoma (TSCC) tissues and cell lines, and to explore the effect of miR-362-5p on TSCC cells proliferation and invasion, and their related mechanisms.

Methods

Real-time quantitative PCR was performed to detect the relative expression of miR-362-5p in TSCC tissues and cell lines. SCC-9 and UM1 cells were transfected with miRNA mimic or antagomiR, cell counting kit-8 (CCK-8) assay was used to evaluate cell proliferation, and transwell assay was carried out to assess cell invasion. TOP/FOP luciferase ratio assay was used to test the Wnt/β-catenin pathway activity. Western blotting was carried out to measure the accumulation of β-catenin in nuclear. Bioinformatics, Western blotting and dual luciferase assay were performed to investigate the target genes of miR-362-5p. Statistical differences were determined by the two-tailed Student′s t-test between two groups of data; a P value<0.05 was considered statistically significant.

Results

miR-362-5p was highly expressed both in TSCC samples and cell lines, P values were less than 0.001. SCC-9 and UM1 cells transfected with antagomiR-362-5p or miR-362-5p mimic significantly inhibited (tSCC-9= 26.53, PSCC-9= 0.0083; tUM1= 24.45, PUM1= 0.0094) or upregulated (tSCC-9=-257.87, PSCC-9= 0.0008; tUM1=-270.44, PUM1= 0.0007) miR-362-5p expression levels. MiR-362-5p inhibition markedly decreased SCC-9 and UM1 cells proliferation (tSCC-9=32.44, PSCC-9= 0.0009; tUM1= 22.32, PUM1= 0.0013) and invasion (tSCC-9= 39.55, PSCC-9= 0.0008; tUM1= 23.78, PUM1= 0.0092) , while the cell proliferation (tSCC-9=-23.35, PSCC-9= 0.0084; tUM1=-17.47, PUM1=0.0138) and invasion (tSCC-9=-26.23, PSCC-9= 0.0072; tUM1=-18.69, PUM1= 0.0145) was apparently enhanced by ectopic expression of miR-362-5p. Compared with that in control cells, miR-362-5p overexpression enhanced the Wnt/β-catenin signaling pathway by down-regulating DKK1 expression.

Conclusion

miR-362-5p activated Wnt/β-catenin signaling by directly targeting DKK1, which enhanced TSCC cells proliferation and invasion.

Key words: Carcinoma, squamous cell, Tongue, Neoplasm invasiveness, MiR-362-5p, DKK1, Wnt/β-catenin signaling pathway
表1 舌鳞状细胞癌组织和相对癌旁正常组织中miR-362-5p的表达比较（±s）
编号 样本量 舌鳞状细胞癌组织 癌旁正常组织 t值 P值
1 3 5.04 ± 1.27 0.50 ± 0.09 -115.34 0.0001
2 3 11.54 ± 3.44 0.49 ± 0.12 -298.89 0.0001
3 3 4.54 ± 0.98 0.40 ± 0.10 -278.55 0.0001
4 3 2.36 ± 0.88 0.28 ± 0.03 -90.67 0.0003
5 3 18.45 ± 1.00 0.75 ± 0.06 -114.87 0.0001
6 3 14.87 ± 3.74 0.47 ± 0.13 -220.65 0.0001
7 3 12.78 ± 2.88 0.58 ± 0.14 -269.85 0.0001
8 3 2.55 ± 0.89 0.32 ± 0.12 -88.56 0.0003
9 3 16.60 ± 1.46 0.67 ± 0.11 -170.36 0.0001
10 3 7.98 ± 1.98 0.45 ± 0.08 -159.88 0.0001
11 3 17.12 ± 4.00 0.57 ± 0.09 -240.44 0.0001
12 3 8.56 ± 2.07 0.68 ± 0.10 -115.78 0.0001
13 3 20.17 ± 3.12 0.75 ± 0.10 -157.87 0.0001
14 3 8.23 ± 2.82 0.50 ± 0.06 -263.68 0.0001
15 3 3.44 ± 0.83 0.58 ± 0.08 -98.99 0.0002
16 3 21.44 ± 3.63 0.61 ± 0.10 -227.76 0.0001
17 3 10.81 ± 1.42 0.44 ± 0.05 -233.34 0.0001
18 3 8.65 ± 1.10 0.57 ± 0.07 -189.57 0.0001
19 3 6.46 ± 1.55 0.64 ± 0.07 -159.98 0.0001
20 3 12.00 ± 1.43 0.55 ± 0.06 -210.68 0.0001
表2 各株舌鳞状细胞癌细胞系和正常舌黏膜上皮细胞中miR-362-5p的表达比较（±s）
组别 样本量(n) miR-362-5p t值 P值
NTSC组 3 0.072 ± 0.015 - -
SCC-9组 3 0.146 ± 0.026 -64.34 0.0014
SCC-15组 3 0.141 ± 0.029 -62.89 0.0014
SCC-25组 3 0.152 ± 0.032 -66.59 0.0013
UM1组 3 0.195 ± 0.055 -73.87 0.0005
UM2组 3 0.124 ± 0.021 -25.97 0.0084
图1 miR-362-5p对舌鳞状细胞癌细胞系SCC-15和UM1侵袭能力的影响
图2 miR-362-5p靶向DKK1激活Wnt/β-catenin信号通路
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