nm23-H1 基因转染前后人舌鳞状细胞癌Tca8113 细胞中蛋白激酶C 转位的变化

doi:10.3877/cma.j.issn.1674-1366.2012.03.003

目的

研究nm23-H1 基因转染诱导人舌鳞状细胞癌（以下简称舌鳞癌）Tca8113 细胞凋亡过程中蛋白激酶C-θ（PKC-θ）的作用。

方法

采用脂质体转染法将真核表达载体pAdEasy-nm23-H1转染人舌鳞癌Tca8113 细胞株。应用PKC-θ 活化抑制剂Calphostin C 和DMSO 预处理细胞30 min后，常规培养24 h，倒置显微镜观察细胞形态的变化；流式细胞仪检测细胞凋亡率；Western blot 分析Tca8113 细胞中PKC-θ 裂解活化状况；酶标仪（ELISA）检测Caspase-3 的相对活性。

结果

人舌鳞癌Tca8113 细胞胞浆中及核周存在PKC-θ 的表达，nm23-H1 基因转染后PKC-θ 从胞浆、核周转位到细胞核内表达。 nm23-H1 基因转染可导致PKC-θ 的裂解活化，形成功能性的催化片段，而Calphostin C抑制转染诱导的PKC-θ 裂解活化。 nm23-H1 基因转染后，Calphostin C 预处理组和DMSO 预处理组Tca8113 的凋亡率、Caspase-3 的活性增加，两组间有明显差异（P＜0.05）。

结论

nm23-H1 诱导细胞凋亡过程中有PKC-θ 的裂解活化，PKC-θ 是nm23-H1 诱导舌鳞癌Tca8113 细胞株凋亡过程中的参与者，PKC-θ 激活Caspase-3 诱导细胞凋亡是nm23-H1 基因诱导肿瘤细胞凋亡机制之一。

关键词: nm23-H1 基因, 蛋白激酶C-θ, 半胱天冬酶-3, 转位, 凋亡

Objective

To study the role of protein kinase C-θ （PKC-θ） in apoptosis in human tongue squamous cell carcinoma Tca8113 cell lines after transfected by nm23-H1 gene.

Methods

Tca8113 ce11s were transfected with pAdEasy-nm23-H1 by lipofection. The cells were pretreated with Calphostin C， a PKC-θ specific suppressor and DMSO for 30 minutes， the morphologic changes of the cells were observed under inverted microscope after routine culture of 24 hours. Apoptotic ratio was detected by flow cytometry. Activation and cleavage of PKC-θ were examin-ed by Western-blotting.Relative activities of Caspase-3 were studied with ELISA.

Results

The expression of PKC-θ was found translocating from cytoplasm and perinucleus to nucleus in Tca8113 cells after transfected with nm23-H1 gene. Gene transfection of nm23-H1 could induce PKC-θ activation and formed functional catalytic fragment， but Calphostin C played a suppressive role. The relative activity of Caspase-3 and apoptotic ratio were increased in both Calphostin C pretreated and DMSO pretreated group after transfected with nm23-H1 gene， and the differences were significant statistically （P＜0.05）.

Conclusions

The results of this study suggest that activation and cleavage of PKC-θ， which were induced by gene transfection of nm23-H1， played a role in the process of Tca8113 cells apoptosis. Activation of Caspase-3 by PKC-θ maybe one of the mechanism of tumor cells apoptosis induced by nm23-H1.

Key words: Nm23-H1 gene, Protein kinase C-θ, Caspase-3, Translocation, Apoptosis

表1 空白对照液及待测样品液配置（μl）

	空白对照	样品
检测缓冲液	90	50
待测样品	0	40
Ac-DEVD-pNA（2 mmol/L）	10	10
总体积	100	100

表1 空白对照液及待测样品液配置（μl）

	空白对照	样品
检测缓冲液	90	50
待测样品	0	40
Ac-DEVD-pNA（2 mmol/L）	10	10
总体积	100	100

图1 PKC-θ 在各组细胞中的表达（免疫组化 × 400） A.Tca8113 细胞组；B.Tca8113-Ad 细胞组；C、D.Tca8113-Ad-nm23-H1 细胞组

图2 各组细胞凋亡形态学观察（×100） A.Tca8113 cell-DMSO 预处理组；B.Tca8113 cell-Calphostin C 预处理组；C.Tca8113-Ad-nm23-H1-DMSO 预处理组；D.Tca8113-Ad-nm23-H1-Calphostin C 预处理组

图3 流式细胞仪检测Tca8113 细胞转染前后亚二倍体峰值变化 A.Tca8113 cell-DMSO 预处理组；B.Tca8113 cell-Calphostin C 预处理组；C.Tca8113-Ad-nm23-H1-DMSO 预处理组；D.Tca8113-Ad-nm23-H1-Calphostin C 预处理组

表2 Calphostin C 预处理组与DMSO 预处理组nm23-H1基因转染前后凋亡率比较（±s，%）

组别	Tca8113 cell	Tca8113-Ad-nm23-H1	P
DMSO预处理组	4.90±0.72	50.2±3.57	＞0.05
Calphostin C预处理组	4.76±0.88	41.5±2.61	＜0.05
P	＜0.05	＜0.05

表2 Calphostin C 预处理组与DMSO 预处理组nm23-H1基因转染前后凋亡率比较（±s，%）

组别	Tca8113 cell	Tca8113-Ad-nm23-H1	P
DMSO预处理组	4.90±0.72	50.2±3.57	＞0.05
Calphostin C预处理组	4.76±0.88	41.5±2.61	＜0.05
P	＜0.05	＜0.05

图4 nm23-H1 转染前后各组细胞PKC-θ Western blot分析图

^a P＞0.05，^bP＜0.05

1	Curtis CD， Likhite VS， McLeod IX， et al. Interaction of the tumor metastasis suppressor nonmetastatic protein 23 homologue H1 and estrogen receptor alpha alters estrogen- responsive gene expression. Cancer Res， 2007，67（21）：10600-10607.
2	范红渠，周卫兵，郝鲁峰，等. 蛋白激酶C-θ 在颊黏膜鳞癌组织中表达的临床研究. 中国临床研究杂志， 2011，19（1）：8-11.
3	Manicassamy S， Sun Z. The critical role of protein kinase Ctheta in Fas/Fas ligand-mediated apoptosis. J Immunol， 2007，178（1）：312-319.
4	Ahmed S， Shibazaki M， Takeuchi T， et al. Protein kinase Ctheta activity is involved in the 2，3，7，8-tetrachlorodibenzo-pdioxin-induced signal transduction pathway leading to apoptosis in L-MAT， a human lymphoblastic T-cell line. FEBS J， 2005，272（4）：903-915.
5	Yoshida K. Nuclear trafficking of pro-apoptotic kinases in response to DNA damage. Trends Mol Med， 2008，14（7）：305-313.
6	Sakowicz-Burkiewicz M， Nishanth G， Helmuth U， et al.Protein kinase C-theta critically regulates the proliferation and survival of pathogen-specific T cells in murine listeriosis. J Immunol， 2008，180（8）：5601-5612.
7	Shakibaei M， John T， Seifarth C， et al. Resveratrol inhibits IL-1 beta-induced stimulation of Caspase-3 and cleavage of PARP in human aticular chondrocytes in vitro. Ann NY Acad Sci， 2007，1095：554-563.
8	Visconti R， D'Adamio L. Functional cloning of genes regulating apoptosis in neuronal cells. Methods Mol Biol， 2007，399：125-131.
9	Manicassamy S， Yin D， Zhang Z， et al. A critical role for protein kinase C-theta-mediated T cell survival in cardiac allograft rejection. J Immunol， 2008，181（1）：513-520.
10	Ou WB， Zhu MJ， Demetri GD， et al. Protein kinase C-theta regulates KIT expression and proliferation in gastrointestinal stromal tumors. Oncogene， 2008，27（42）：5624-5634.
11	Hirata H， Takahashi A， Kobayashi S， et al. Caspases are activated in a branched protease cascade and control distinct downstream processes in Fas-induced apoptosis. J Exp Med，1998，187（4）：587-600.
12	Gross K， Karagiannides I， Thomou T， et al. Substance P promotes expansion of human mesenteric preadipocytes through proliferative and antiapoptotic pathways. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol， 2009，296（5）：G1012-1019.
13	Sakowicz-Burkiewicz M， Nishanth G， Helmuth U， et al.Protein kinase C-theta critically regulates the proliferation and survival of pathogen-specific T cells in murine listeriosis. J Immunol， 2008，180（8）：5601-5612.

[1]	周圆圆, 周怡, 段亚阳, 张怡卿, 朱峰宇, 张超学. 低强度超声缓解顺铂所致小鼠卵巢损伤的实验研究[J/OL]. 中华医学超声杂志（电子版）, 2024, 21(12): 1132-1141.
[2]	钟雅雯, 王煜, 王海臻, 黄莉萍. 肌苷通过抑制线粒体通透性转换孔开放缓解缺氧/复氧诱导的人绒毛膜滋养层细胞凋亡[J/OL]. 中华妇幼临床医学杂志(电子版), 2024, 20(05): 525-533.
[3]	孙鸿坤, 艾虹, 陈正. 内质网应激介导的牙周炎骨改建失衡的研究进展[J/OL]. 中华口腔医学研究杂志(电子版), 2024, 18(04): 211-218.
[4]	廖泽楷, 梁爱琳, 龚启梅. 根尖周病中程序性细胞死亡的研究进展[J/OL]. 中华口腔医学研究杂志(电子版), 2024, 18(03): 150-155.
[5]	唐亦骁, 陈峻, 连正星, 胡海涛, 鲁迪, 徐骁, 卫强. 白果内酯对小鼠肝缺血再灌注损伤保护作用研究[J/OL]. 中华移植杂志(电子版), 2024, 18(05): 278-282.
[6]	胡思平, 熊性宇, 徐航, 杨璐. 衰老相关分泌表型因子在前列腺癌发生发展中的作用机制[J/OL]. 中华腔镜泌尿外科杂志(电子版), 2024, 18(05): 425-434.
[7]	郑俊, 吴杰英, 谭海波, 郑安全, 李腾成. EGFR-MEK-TZ三联合分子的构建及其对去势抵抗性前列腺癌细胞增殖与凋亡的影响[J/OL]. 中华腔镜泌尿外科杂志(电子版), 2024, 18(05): 503-508.
[8]	李勇, 彭天明, 王倩倩, 陈育纯, 蒲小勇, 刘久敏. 基于失巢凋亡相关基因的膀胱癌预后模型构建及分析[J/OL]. 中华腔镜泌尿外科杂志(电子版), 2024, 18(04): 331-339.
[9]	黄程鑫, 陈莉, 刘伊楚, 王水良, 赖晓凤. OPA1 在乳腺癌组织的表达特征及在ER阳性乳腺癌细胞中的生物学功能研究[J/OL]. 中华细胞与干细胞杂志(电子版), 2024, 14(05): 275-284.
[10]	季加翠, 孙春斌, 罗恩丽. 姜黄素通过调节NF-κB/NLRP3通路减轻LPS诱导小胶质细胞神经炎症损伤[J/OL]. 中华细胞与干细胞杂志(电子版), 2024, 14(04): 193-203.
[11]	杜霞, 马梦青, 曹长春. 造影剂诱导的急性肾损伤的发病机制及干预靶点研究进展[J/OL]. 中华肾病研究电子杂志, 2024, 13(05): 279-282.
[12]	王国强, 张纲, 唐建坡, 张玉国, 杨永江. LINC00839 调节miR-17-5p/WEE1 轴对结直肠癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响[J/OL]. 中华消化病与影像杂志(电子版), 2024, 14(06): 491-499.
[13]	靳英, 付小霞, 陈美茹, 袁璐, 郝力瑶. CD147调控MAPK信号通路对结肠癌细胞增殖和凋亡的影响及机制研究[J/OL]. 中华临床医师杂志(电子版), 2024, 18(05): 474-480.
[14]	刘霖, 张文欢, 宋雅茹, 姜云璐. Apelin-13 在阿尔茨海默病中的神经保护作用机制研究进展[J/OL]. 中华诊断学电子杂志, 2024, 12(04): 276-280.
[15]	江倩, 王红蕊, 朱玥荃, 李响, 耿晓坤, 李凤武. 药物诱导亚低温对缺血性脑卒中的神经保护作用及DRP-1 调控线粒体功能在其中的潜在分子机制[J/OL]. 中华脑血管病杂志(电子版), 2024, 18(06): 586-594.

阅读次数

全文

摘要

选择文件类型/文献管理软件名称

选择包含的内容

Changes of PKC-θ translocation before and after transfection with nm23-H1 gene in human tongue squamous cell carcinoma Tca8113 c

模态框（Modal）标题

选择文件类型/文献管理软件名称

选择包含的内容

Changes of PKC-θ translocation before and after transfection with nm23-H1 gene in human tongue squamous cell carcinoma Tca8113 c