高糖状态下人牙龈上皮细胞的生物学特性

doi:10.3877/cma.j.issn.1674-1366.2015.02.003

中华口腔医学研究杂志(电子版) ›› 2015, Vol. 09 ›› Issue (02) : 100 -105. doi: 10.3877/cma.j.issn.1674-1366.2015.02.003

所属专题：文献；

基础研究

高糖状态下人牙龈上皮细胞的生物学特性

杨熙¹, 谢宝仪¹, 黄馨¹, 轩东英¹, 吴嘉怡², 徐喆³, 章锦才¹^,^†(

)

^1. 510280　广州，广东省口腔医院·南方医科大学附属口腔医院牙周科
^2. 518001　深圳，广东省深圳牙科医疗中心牙周科
^3. 518036　深圳，北京大学深圳医院口腔科

收稿日期:2015-01-08 出版日期:2015-04-01
通信作者: 章锦才
基金资助:
国家自然科学基金(81371151、81271160); 广东省自然科学基金博士启动项目(2014A030310405)

Effects of high glucose on the biological characteristics of human gingival epithelial cells

Xi Yang¹, Baoyi Xie¹, Xin Huang¹, Dongying Xuan¹, Jiayi Wu², Zhe Xu³, Jincai Zhang¹^,^†()

^1. Department of Periodontology, Guangdong Provincial Stomatological Hospital, Southern Medical University, Guangzhou, 510280, China
^2. Department of Periodontology, Guangdong Shenzhen Dental Center, Shenzhen 518001, China
^3. Department of Stomatology, Peking University Shenzhen Hospital, Shenzhen 518036, China

Received:2015-01-08 Published:2015-04-01
Corresponding author: Jincai Zhang
About author:
Corresponding author: Zhang Jincai, Email: jincaizhang@live.cn, Tel: 020-84413940

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引用本文：

杨熙, 谢宝仪, 黄馨, 轩东英, 吴嘉怡, 徐喆, 章锦才. 高糖状态下人牙龈上皮细胞的生物学特性[J]. 中华口腔医学研究杂志(电子版), 2015, 09(02): 100-105.

Xi Yang, Baoyi Xie, Xin Huang, Dongying Xuan, Jiayi Wu, Zhe Xu, Jincai Zhang. Effects of high glucose on the biological characteristics of human gingival epithelial cells[J]. Chinese Journal of Stomatological Research(Electronic Edition), 2015, 09(02): 100-105.

目的

观察高糖状态对人牙龈上皮细胞生物学特性的影响。

方法

原代培养人牙龈上皮细胞（hGEC），取第三代细胞分为正常组（培养液含5.5 mmol/L D-葡萄糖）、高糖组（培养液含25 mmol/L D-葡萄糖）和甘露醇组（含5.5 mmol/L D-葡萄糖及19.5 mmol/L甘露醇的培养基），采用MTS法检测细胞的增殖情况，流式细胞术检测细胞的生长周期及凋亡情况，划痕实验检测细胞迁移能力。采用重复测量的方差分析进行统计分析。

结果

高糖组、正常组、甘露醇组三组hGEC相比较，细胞增殖活性（F = 5.053，P = 0.052）、细胞周期分布（F = 1.252，P = 0.351）及凋亡细胞比例（F = 0.325，P = 0.717）差异均无统计学意义；划痕24 h时，糖尿病组的划痕迁移率显著低于正常组（F = 54.453，P = 0.000）。

结论

高糖状态下hGEC增殖及凋亡无显著性改变，但细胞迁移能力出现显著下降。

关键词: 高糖, 牙龈上皮细胞, 增殖, 凋亡, 细胞迁移

Objective

To investigate the biological characteristics of human gingival epithelial cells (hGECs) in high-glucose environments.

Methods

Cultured primary hGECs, logarithmic growth phase of the 3rd passage cells were used for subsequent experiments. Experimental groups: (1) high glucose group: K-SFM medium containing 25 mmol/L D-glucose; (2) normal group: K-SFM medium containing 5.5 mmol/L D-glucose; (3) mannitol group: K-SFM medium containing 5.5 mmol/L D-glucose and 19.5 mmol/L mannitol. We used the MTS method to detect the proliferation of hGECs, applied flow cytometry to detect cell cycle and apoptosis of hGECs, and utilized wound healing test to detect migration of hGECs. Comparisons of the data among different groups were performed by repeated measures analysis of variance (ANOVA) .

Results

There is no statistically significant difference in cell proliferation activity (F = 5.053, P = 0.052) , proportion of cell proliferate (DNA synthesis phase) (F = 1.252, P = 0.351) and cell apoptosis (F = 0.325, P = 0.717) . Wound healing test showed after culture for 24 h, the scratch migration rate of hGECs in the high group was significantly lower than cells in the normal glucose group and mannitol group (F = 54.453, P = 0.000) .

Conclusion

High glucose had no significantly effect on cell morphology, cell proliferation and apoptosis of hGECs. However, it weakened the ability of cell migration of hGECs.

Key words: High glucose, Gingival epithelial cells, Proliferation, Apoptosis, Cell migration

图1 体外培养人牙龈上皮细胞的免疫组织化学染色

图2 三组人牙龈上皮细胞的体外增殖生长曲线

表1 三组人牙龈上皮细胞的细胞生长周期吸光度值比较（ ± s）

组别	第1天	第2天	第3天	第4天	第5天	第6天	第7天	F值	P值
对照组	0.08 ± 0.02	0.21 ± 0.04	0.56 ± 0.06	0.86 ± 0.11	1.07 ± 0.15	1.01 ± 0.03	0.82 ± 0.06	76.398	0.000
高糖组	0.10 ± 0.02	0.25 ± 0.08	0.51 ± 0.04	0.67 ± 0.04	0.94 ± 0.03	0.73 ± 0.09	0.78 ± 0.05	98.849	0.000
甘露醇组	0.07 ± 0.02	0.24 ± 0.06	0.59 ± 0.08	0.78 ± 0.12	1.05 ± 0.11	0.92 ± 0.12	0.84 ± 0.10	59.487	0.000
F值	2.053	0.210	1.324	2.756	1.229	8.360	0.739	5.053^a	0.052^a
P值	0.209	0.817	0.334	0.142	0.357	0.018	0.517	2.052^b	0.108^b

表1 三组人牙龈上皮细胞的细胞生长周期吸光度值比较（ ± s）

组别	第1天	第2天	第3天	第4天	第5天	第6天	第7天	F值	P值
对照组	0.08 ± 0.02	0.21 ± 0.04	0.56 ± 0.06	0.86 ± 0.11	1.07 ± 0.15	1.01 ± 0.03	0.82 ± 0.06	76.398	0.000
高糖组	0.10 ± 0.02	0.25 ± 0.08	0.51 ± 0.04	0.67 ± 0.04	0.94 ± 0.03	0.73 ± 0.09	0.78 ± 0.05	98.849	0.000
甘露醇组	0.07 ± 0.02	0.24 ± 0.06	0.59 ± 0.08	0.78 ± 0.12	1.05 ± 0.11	0.92 ± 0.12	0.84 ± 0.10	59.487	0.000
F值	2.053	0.210	1.324	2.756	1.229	8.360	0.739	5.053^a	0.052^a
P值	0.209	0.817	0.334	0.142	0.357	0.018	0.517	2.052^b	0.108^b

图3 三组人牙龈上皮细胞生长周期的比较

表2 三组人牙龈上皮细胞生长周期中DNA合成期细胞比例的比较（ ± s，%）

组别	周期24 h	周期48 h	F值	P值
正常组	23.30 ± 3.04	17.62 ± 2.34	126.404	0.008
高糖组	19.55 ± 2.28	16.53 ± 2.09	1.733	0.319
甘露醇组	21.38 ± 3.48	18.36 ± 1.22	2.067	0.287
F值	1.194	0.676	1.252^a	0.351^a
P值	0.366	0.544	0.711^b	0.528^b

表2 三组人牙龈上皮细胞生长周期中DNA合成期细胞比例的比较（ ± s，%）

组别	周期24 h	周期48 h	F值	P值
正常组	23.30 ± 3.04	17.62 ± 2.34	126.404	0.008
高糖组	19.55 ± 2.28	16.53 ± 2.09	1.733	0.319
甘露醇组	21.38 ± 3.48	18.36 ± 1.22	2.067	0.287
F值	1.194	0.676	1.252^a	0.351^a
P值	0.366	0.544	0.711^b	0.528^b

图4 三组人牙龈上皮细胞凋亡的比较

表3 三组人牙龈上皮细胞凋亡的比较（ ± s，%）

组别	凋亡24 h	凋亡48 h	F值	P值
正常组	2.20 ± 0.29	6.17 ± 1.24	27.626	0.034
高糖组	2.56 ± 0.39	6.88 ± 1.63	34.392	0.028
甘露醇组	2.37 ± 0.60	6.30 ± 1.56	13.791	0.065
F值	0.482	0.195	0.325^a	0.717^a
P值	0.640	0.828	0.064^b	0.938^b

表3 三组人牙龈上皮细胞凋亡的比较（ ± s，%）

组别	凋亡24 h	凋亡48 h	F值	P值
正常组	2.20 ± 0.29	6.17 ± 1.24	27.626	0.034
高糖组	2.56 ± 0.39	6.88 ± 1.63	34.392	0.028
甘露醇组	2.37 ± 0.60	6.30 ± 1.56	13.791	0.065
F值	0.482	0.195	0.325^a	0.717^a
P值	0.640	0.828	0.064^b	0.938^b

图5 三组人牙龈上皮细胞划痕试验的比较

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