microRNA-639调控舌鳞状细胞癌上皮间质转化的实验研究

doi:10.3877/cma.j.issn.1674-1366.2015.01.004

中华口腔医学研究杂志(电子版) ›› 2015, Vol. 09 ›› Issue (01) : 21 -28. doi: 10.3877/cma.j.issn.1674-1366.2015.01.004

所属专题：文献；

基础研究

microRNA-639调控舌鳞状细胞癌上皮间质转化的实验研究

武东辉¹, 王友元², 范松², 林钊宇², 李劲松²^,^†(

)

^1. 510220　广州市海珠区口腔医院口腔颌面外科
^2. 510120　广州，中山大学孙逸仙纪念医院口腔颌面外科

收稿日期:2014-11-24 出版日期:2015-02-01
通信作者: 李劲松
基金资助:
国家自然科学基金(81272951、81072225); 广东省自然科学基金(重点项目，10251008901000022); 高等学校博士学科点专项科研基金(博导类，20110171110068); 广州市科技计划(11C22060035)

MicroRNA-639 regulates epithelial-mesenchymal transition of tongue squamous carcinoma

Donghui Wu¹, Youyuan Wang², Song Fan², Zhaoyu Lin², Jinsong Li²^,^†()

^1. Stomatological Hospital of Haizhu District, Guangzhou 510220, China
^2. Department of Stomatology, The Sun Yat-sen Memorial Hospital, Sun Yat-sen University, Guangzhou 510120, China

Received:2014-11-24 Published:2015-02-01
Corresponding author: Jinsong Li
About author:
Corresponding author: Li Jinsong, Email: lijinsong1967@163.com, Tel: 020-81332425

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引用本文：

武东辉, 王友元, 范松, 林钊宇, 李劲松. microRNA-639调控舌鳞状细胞癌上皮间质转化的实验研究[J/OL]. 中华口腔医学研究杂志(电子版), 2015, 09(01): 21-28.

Donghui Wu, Youyuan Wang, Song Fan, Zhaoyu Lin, Jinsong Li. MicroRNA-639 regulates epithelial-mesenchymal transition of tongue squamous carcinoma[J/OL]. Chinese Journal of Stomatological Research(Electronic Edition), 2015, 09(01): 21-28.

目的

探讨微小RNA（miR）-639对转化生长因子β1（TGF-β1）所诱导的舌鳞状细胞癌（TSCC）细胞上皮-间质转化（EMT）的调控作用。

方法

应用TGF-β1刺激上皮型SCC9、CAL27细胞，诱导形成相对应的间质型细胞SCC9 TGF-β1、CAL27 TGF-β1。通过实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）、Western blot检测EMT的标记物，通过芯片检测得到一组差异性表达的miRNA，通过实时荧光定量PCR验证芯片检测结果。选取发生EMT的TSCC细胞中低表达的miR-639为研究对象，通过脂质体介导分别将miR-639的反义核苷酸（miR-639 ASO）和miR-639的拟似物（miR-639 mimics）转染上皮型和相对应的间质型细胞，采用实时荧光定量PCR检测转染前后两株细胞中miR-639的表达变化，通过Transwell实验检测各组细胞侵袭、迁移能力差异。两组间均数的比较采用Student′s t检验，P < 0.05为差异具有统计学意义。

结果

实验组miR-639的表达明显上调或下调，阴性对照组与空白对照组中miR-639的表达无明显变化。Transwell实验检测转染miR-639 ASO后上皮细胞的侵袭迁移能力显著升高（P < 0.05），并且可以诱导细胞发生EMT；转染miR-639 mimics后诱导所形成的间质型TSCC细胞的侵袭迁移能力显著降低（P < 0.05），同时可逆转EMT。

结论

miR-639 mimics对TGF-β1所诱导形成的的间质型TSCC细胞具有调控作用，转染miR-639 mimics可逆转EMT并能有效地抑制间质型细胞SCC9 TGF-β1的侵袭迁移能力。

关键词: 微小RNA-639, 转化生长因子β1, 上皮-间质转化, 肿瘤，鳞状细胞, 舌肿瘤

Objective

To investigate the regulatory function of miR-639 on the epithelial-mesenchymal transition in tongue squamous carcinoma.

Methods

SCC9 TGF-β1 and CAL27 TGF-β1 were obtained by treating SCC9 and CAL27 with human recombinant TGF-β1. Expressions of EMT markers E-cadherin, Vimentin, were determined by quantitative real-time PCR and western blotting. MicroRNA microarray was used to demonstrate the differentially expressed miRNA and quantitative real-time PCR were used to verify their expressions. We disturbed expressions of miR-639 and investigated effects on epithelial-mesenchymal features, invasiveness and motility of TSCC cells.

Results

Transfection of the TGF-β1 induced TSCC cells with miR-639 mimics, but not the non-relevant miRNA mimics specifically increased miR-639 level. Reduction of miR-639 improved the ability of invasion and migration (P < 0.05) , induced EMT in TSCC cells. Ectopic expression of miR-639 surpressed the ability of invasion, migration (P < 0.05) and reversed the mesenchymal features in TSCC cells.

Conclusions

MiR-639 mimics could regulate EMT in TSCC cells. Transfection of the TGF-β1 induced TSCC cells with miR-639 mimics could reverse the mesenchymal features and surpress the ability of invasion and migration in TSCC cells.

Key words: MicroRNA-639, Transforming growth factor-β1, Epithelial-mesenchymal transition, Neoplasms, squamous cell, Tongue neoplasms

图1 TGF-β1诱导后上皮型细胞形态发生变化（× 200）

图2 TGF-β1诱导前后SCC9细胞EMT相关指标变化

图3 TGF-β1诱导前后CAL27细胞EMT相关指标变化

表1 SCC9和SCC9 TGF-β1差异表达的miRNA

编号	基因名称	SCC9 TGF-β1/SCC9
1	hsa-miR-639	0.17
2	hsa-miR-1200	0.17
3	hsa-miR-1184	0.21
4	hsa-miR-142-5p	0.22
5	hsa-miR-485-3p	0.23
6	hsa-miR-451	0.24
7	hsa-miR-140-3p	0.26
8	hsa-miR-3195	0.27
9	hsa-miR-601	0.28
10	hsa-miR-144	0.18
11	hsa-miR-361-3p	0.28
12	hsa-miR-187	7.25
13	hsa-miR-744	4.78
14	hsa-miR-4301	4.37
15	hsa-miR-27a	3.32
16	hsa-miR-301a	3.31
17	hsa-miR-149	3.10
18	hsa-miR-27b	3.06
19	hsa-miR-15b	3.00
20	hsa-miR-26b	2.77
21	hsa-miR-7	2.62
22	hsa-miR-151-5p	2.47
23	hsa-miR-30b	2.47
24	hsa-miR-33a	2.45
25	hsa-miR-20a	2.36

表1 SCC9和SCC9 TGF-β1差异表达的miRNA

编号	基因名称	SCC9 TGF-β1/SCC9
1	hsa-miR-639	0.17
2	hsa-miR-1200	0.17
3	hsa-miR-1184	0.21
4	hsa-miR-142-5p	0.22
5	hsa-miR-485-3p	0.23
6	hsa-miR-451	0.24
7	hsa-miR-140-3p	0.26
8	hsa-miR-3195	0.27
9	hsa-miR-601	0.28
10	hsa-miR-144	0.18
11	hsa-miR-361-3p	0.28
12	hsa-miR-187	7.25
13	hsa-miR-744	4.78
14	hsa-miR-4301	4.37
15	hsa-miR-27a	3.32
16	hsa-miR-301a	3.31
17	hsa-miR-149	3.10
18	hsa-miR-27b	3.06
19	hsa-miR-15b	3.00
20	hsa-miR-26b	2.77
21	hsa-miR-7	2.62
22	hsa-miR-151-5p	2.47
23	hsa-miR-30b	2.47
24	hsa-miR-33a	2.45
25	hsa-miR-20a	2.36

图4 miRNA芯片筛选数据图

图5 实时荧光定量PCR进一步证实miR-639在SCC9和SCC9 TGF-β1细胞中差异性表达

图6 高表达miR-639可逆转SCC9 TGF-β1细胞的间质特性

图7 高表达miR-639可逆转CAL27 TGF-β1细胞的间质特性

图8 高表达miR-639抑制SCC9 TGF-β1细胞的侵袭迁移能力

图9 高表达miR-639抑制CAL27 TGF-β1细胞的侵袭迁移能力

图10 敲低miR-639促使SCC9细胞发生EMT

图11 低表达miR-639提高SCC9细胞的侵袭迁移能力

图12 敲低miR-639促使CAL27细胞发生EMT

图13 低表达miR-639提高CAL27细胞的侵袭迁移能力

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