microRNA-639调控舌鳞状细胞癌上皮间质转化的实验研究

doi:10.3877/cma.j.issn.1674-1366.2015.01.004

中华口腔医学研究杂志(电子版) ›› 2015, Vol. 09 ›› Issue (01) : 21 -28. doi: 10.3877/cma.j.issn.1674-1366.2015.01.004

所属专题：文献；

基础研究

microRNA-639调控舌鳞状细胞癌上皮间质转化的实验研究

武东辉¹, 王友元², 范松², 林钊宇², 李劲松²^,^†(

)

^1. 510220　广州市海珠区口腔医院口腔颌面外科
^2. 510120　广州，中山大学孙逸仙纪念医院口腔颌面外科

收稿日期:2014-11-24 出版日期:2015-02-01
通信作者: 李劲松
基金资助:
国家自然科学基金(81272951、81072225); 广东省自然科学基金(重点项目，10251008901000022); 高等学校博士学科点专项科研基金(博导类，20110171110068); 广州市科技计划(11C22060035)

MicroRNA-639 regulates epithelial-mesenchymal transition of tongue squamous carcinoma

Donghui Wu¹, Youyuan Wang², Song Fan², Zhaoyu Lin², Jinsong Li²^,^†()

^1. Stomatological Hospital of Haizhu District, Guangzhou 510220, China
^2. Department of Stomatology, The Sun Yat-sen Memorial Hospital, Sun Yat-sen University, Guangzhou 510120, China

Received:2014-11-24 Published:2015-02-01
Corresponding author: Jinsong Li
About author:
Corresponding author: Li Jinsong, Email: lijinsong1967@163.com, Tel: 020-81332425

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引用本文：

武东辉, 王友元, 范松, 林钊宇, 李劲松. microRNA-639调控舌鳞状细胞癌上皮间质转化的实验研究[J]. 中华口腔医学研究杂志(电子版), 2015, 09(01): 21-28.

Donghui Wu, Youyuan Wang, Song Fan, Zhaoyu Lin, Jinsong Li. MicroRNA-639 regulates epithelial-mesenchymal transition of tongue squamous carcinoma[J]. Chinese Journal of Stomatological Research(Electronic Edition), 2015, 09(01): 21-28.

目的

探讨微小RNA（miR）-639对转化生长因子β1（TGF-β1）所诱导的舌鳞状细胞癌（TSCC）细胞上皮-间质转化（EMT）的调控作用。

方法

应用TGF-β1刺激上皮型SCC9、CAL27细胞，诱导形成相对应的间质型细胞SCC9 TGF-β1、CAL27 TGF-β1。通过实时荧光定量聚合酶链反应（PCR）、Western blot检测EMT的标记物，通过芯片检测得到一组差异性表达的miRNA，通过实时荧光定量PCR验证芯片检测结果。选取发生EMT的TSCC细胞中低表达的miR-639为研究对象，通过脂质体介导分别将miR-639的反义核苷酸（miR-639 ASO）和miR-639的拟似物（miR-639 mimics）转染上皮型和相对应的间质型细胞，采用实时荧光定量PCR检测转染前后两株细胞中miR-639的表达变化，通过Transwell实验检测各组细胞侵袭、迁移能力差异。两组间均数的比较采用Student′s t检验，P < 0.05为差异具有统计学意义。

结果

实验组miR-639的表达明显上调或下调，阴性对照组与空白对照组中miR-639的表达无明显变化。Transwell实验检测转染miR-639 ASO后上皮细胞的侵袭迁移能力显著升高（P < 0.05），并且可以诱导细胞发生EMT；转染miR-639 mimics后诱导所形成的间质型TSCC细胞的侵袭迁移能力显著降低（P < 0.05），同时可逆转EMT。

结论

miR-639 mimics对TGF-β1所诱导形成的的间质型TSCC细胞具有调控作用，转染miR-639 mimics可逆转EMT并能有效地抑制间质型细胞SCC9 TGF-β1的侵袭迁移能力。

关键词: 微小RNA-639, 转化生长因子β1, 上皮-间质转化, 肿瘤，鳞状细胞, 舌肿瘤

Objective

To investigate the regulatory function of miR-639 on the epithelial-mesenchymal transition in tongue squamous carcinoma.

Methods

SCC9 TGF-β1 and CAL27 TGF-β1 were obtained by treating SCC9 and CAL27 with human recombinant TGF-β1. Expressions of EMT markers E-cadherin, Vimentin, were determined by quantitative real-time PCR and western blotting. MicroRNA microarray was used to demonstrate the differentially expressed miRNA and quantitative real-time PCR were used to verify their expressions. We disturbed expressions of miR-639 and investigated effects on epithelial-mesenchymal features, invasiveness and motility of TSCC cells.

Results

Transfection of the TGF-β1 induced TSCC cells with miR-639 mimics, but not the non-relevant miRNA mimics specifically increased miR-639 level. Reduction of miR-639 improved the ability of invasion and migration (P < 0.05) , induced EMT in TSCC cells. Ectopic expression of miR-639 surpressed the ability of invasion, migration (P < 0.05) and reversed the mesenchymal features in TSCC cells.

Conclusions

MiR-639 mimics could regulate EMT in TSCC cells. Transfection of the TGF-β1 induced TSCC cells with miR-639 mimics could reverse the mesenchymal features and surpress the ability of invasion and migration in TSCC cells.

Key words: MicroRNA-639, Transforming growth factor-β1, Epithelial-mesenchymal transition, Neoplasms, squamous cell, Tongue neoplasms

图1 TGF-β1诱导后上皮型细胞形态发生变化（× 200）

图2 TGF-β1诱导前后SCC9细胞EMT相关指标变化

图3 TGF-β1诱导前后CAL27细胞EMT相关指标变化

表1 SCC9和SCC9 TGF-β1差异表达的miRNA

编号	基因名称	SCC9 TGF-β1/SCC9
1	hsa-miR-639	0.17
2	hsa-miR-1200	0.17
3	hsa-miR-1184	0.21
4	hsa-miR-142-5p	0.22
5	hsa-miR-485-3p	0.23
6	hsa-miR-451	0.24
7	hsa-miR-140-3p	0.26
8	hsa-miR-3195	0.27
9	hsa-miR-601	0.28
10	hsa-miR-144	0.18
11	hsa-miR-361-3p	0.28
12	hsa-miR-187	7.25
13	hsa-miR-744	4.78
14	hsa-miR-4301	4.37
15	hsa-miR-27a	3.32
16	hsa-miR-301a	3.31
17	hsa-miR-149	3.10
18	hsa-miR-27b	3.06
19	hsa-miR-15b	3.00
20	hsa-miR-26b	2.77
21	hsa-miR-7	2.62
22	hsa-miR-151-5p	2.47
23	hsa-miR-30b	2.47
24	hsa-miR-33a	2.45
25	hsa-miR-20a	2.36

表1 SCC9和SCC9 TGF-β1差异表达的miRNA

编号	基因名称	SCC9 TGF-β1/SCC9
1	hsa-miR-639	0.17
2	hsa-miR-1200	0.17
3	hsa-miR-1184	0.21
4	hsa-miR-142-5p	0.22
5	hsa-miR-485-3p	0.23
6	hsa-miR-451	0.24
7	hsa-miR-140-3p	0.26
8	hsa-miR-3195	0.27
9	hsa-miR-601	0.28
10	hsa-miR-144	0.18
11	hsa-miR-361-3p	0.28
12	hsa-miR-187	7.25
13	hsa-miR-744	4.78
14	hsa-miR-4301	4.37
15	hsa-miR-27a	3.32
16	hsa-miR-301a	3.31
17	hsa-miR-149	3.10
18	hsa-miR-27b	3.06
19	hsa-miR-15b	3.00
20	hsa-miR-26b	2.77
21	hsa-miR-7	2.62
22	hsa-miR-151-5p	2.47
23	hsa-miR-30b	2.47
24	hsa-miR-33a	2.45
25	hsa-miR-20a	2.36

图4 miRNA芯片筛选数据图

图5 实时荧光定量PCR进一步证实miR-639在SCC9和SCC9 TGF-β1细胞中差异性表达

图6 高表达miR-639可逆转SCC9 TGF-β1细胞的间质特性

图7 高表达miR-639可逆转CAL27 TGF-β1细胞的间质特性

图8 高表达miR-639抑制SCC9 TGF-β1细胞的侵袭迁移能力

图9 高表达miR-639抑制CAL27 TGF-β1细胞的侵袭迁移能力

图10 敲低miR-639促使SCC9细胞发生EMT

图11 低表达miR-639提高SCC9细胞的侵袭迁移能力

图12 敲低miR-639促使CAL27细胞发生EMT

图13 低表达miR-639提高CAL27细胞的侵袭迁移能力

[1]	Parkin DM, Bray F, Ferlay J，et al. Global cancer statistics，2002[J]. CA Cancer J Clin，2005，55(2):74-108.
[2]	Neville BW, Day TA. Oral cancer and precancerous lesions[J]. CA Cancer J Clin，2002，52(4):195-215.
[3]	Thieu W, Tilki D, deVere White RW，et al. The role of microRNA in castration-resistant prostate cancer[J]. Urol Oncol，2014，32(5):517-523.
[4]	Williams LV, Veliceasa D, Vinokour E，et al. miR-200b inhibits prostate cancer EMT，growth and metastasis[J]. PLoS One，2013，8(12):e83991.
[5]	Wang Q, Li X, Zhu Y，et al. MicroRNA-16 suppresses epithelial-mesenchymal transition related gene expression in human glioma[J]. Mol Med Rep，2014，10(6):3310-3314.
[6]	Wakefield LM, Roberts AB. TGF-beta signaling：positive and negative effects on tumorigenesis[J]. Curr Opin Genet Dev，2002，12(1):22-29.
[7]	Bierie B, Moses HL. Tumour microenvironment：TGFbeta：the molecular Jekyll and Hyde of cancer[J]. Nat Rev Cancer，2006，6(7):506-520.
[8]	Ikushima H, Miyazono K. TGFbeta signalling：a complex web in cancer progression[J]. Nat Rev Cancer，2010，10(6):415-424.
[9]	Liu CG, Calin GA, Meloon B，et al. An oligonucleotide microchip for genome-wide microRNA profiling in human and mouse tissues[J]. Proc Natl Acad Sci U S A，2004，101(26):9740-9744.
[10]	Li J, Huang H, Sun L，et al. MiR-21 indicates poor prognosis in tongue squamous cell carcinomas as an apoptosis inhibitor[J]. Clin Cancer Res，2009，15(12):3998-4008.
[11]	Zhang J, Tian XJ, Zhang H，et al. TGF-β-induced epithelial-to-mesenchymal transition proceeds through stepwise activation of multiple feedback loops[J]. Sci Signal，2014，7(345):ra91.
[12]	Cheng AM, Byrom MW, Shelton J，et al. Antisense inhibition of human miRNAs and indications for an involvement of miRNA in cell growth and apoptosis[J]. Nucleic Acids Res，2005，33(4):1290-1297.
[13]	Wang X, Wang X. Systematic identification of microRNA functions by combining target prediction and expression profiling[J]. Nucleic Acids Res，2006，34(5):1646-1652.

[1]	李康, 冀亮, 赵维, 林乐岷. 自噬在乳腺癌生物学进展中的双重作用[J]. 中华乳腺病杂志(电子版), 2023, 17(04): 195-202.
[2]	林昌盛, 战军, 肖雪. 上皮性卵巢癌患者诊疗中基因检测及分子靶向药物治疗[J]. 中华妇幼临床医学杂志(电子版), 2023, 19(05): 505-510.
[3]	唐英, 唐方祥, 胡辉权, 徐凡, 宾冬梅. 淋巴细胞与单核细胞比值对早期宫颈癌患者盆腔淋巴结转移的预测价值[J]. 中华妇幼临床医学杂志(电子版), 2020, 16(01): 100-106.
[4]	董婕, 陈瑛瑛, 王凯怡. 高危型人乳头瘤病毒癌基因-E6/E7 mRNA检测的临床价值[J]. 中华妇幼临床医学杂志(电子版), 2018, 14(05): 527-534.
[5]	孙蕾蕾, 朱旅云, 杨少玲. 负压伤口疗法对糖尿病足轻、中度缺血创面肉芽组织转化生长因子-β1表达的影响[J]. 中华损伤与修复杂志(电子版), 2019, 14(01): 20-25.
[6]	李文清, 刘海潮, 梁建锋, 陈冠辉, 竺越, 张鸣, 侯劲松. 转化生长因子β1增强糖酵解促进舌鳞状细胞癌细胞上皮间充质转化及迁移与侵袭[J]. 中华口腔医学研究杂志(电子版), 2018, 12(03): 144-151.
[7]	李永宁, 付雪芹, 李英, 刘鹏, 刘松柏, 潘耀振. 基因相似序列家族成员126A靶向调控波形蛋白促进胰腺癌细胞侵袭和迁移及其机制[J]. 中华普外科手术学杂志(电子版), 2023, 17(02): 139-144.
[8]	贾宝庆, 李鹏, 王白石, 郭少华, 刘新, 王绪宁, 徐茂林. 机器人下近端胃癌根治术[J]. 中华普外科手术学杂志(电子版), 2018, 12(02): 108-108.
[9]	李佳怡, 王亚菲, 郝月琴, 陈建攸. CXCL14、TGF-β1和CTGF水平与特发性肺纤维化的关系[J]. 中华肺部疾病杂志(电子版), 2021, 14(02): 222-224.
[10]	王强, 陈鑫, 翁小雪, 庄永泽, 俞国庆. 硫酸吲哚酚通过TGF-β1诱导腹膜间皮细胞转分化[J]. 中华细胞与干细胞杂志(电子版), 2022, 12(06): 329-334.
[11]	李卓林, 贾如雪, 吴亚婷, 张胜行, 王水良. 肿瘤转移的分子机制及靶向干预研究新进展[J]. 中华细胞与干细胞杂志(电子版), 2022, 12(01): 51-58.
[12]	沈秉正, 祝成亮, 胡振夏, 李丹, 王娜, 陈莹, 李景, 喻研. 美沙拉秦联合肠胃宁治疗溃疡性结肠炎疗效及对TGF-β1、IGF-1的影响[J]. 中华结直肠疾病电子杂志, 2019, 08(02): 131-134.
[13]	张艳, 秦方园, 赵荣, 钱文娟, 顾毅锋, 张亚兵. 富亮氨酸a2糖蛋白1与类风湿关节炎活动性的相关性[J]. 中华临床医师杂志(电子版), 2022, 16(11): 1126-1130.
[14]	贾鹏远, 张亮. 左卡尼汀联合卡托普利对扩张型心肌病合并心力衰竭的疗效观察[J]. 中华心脏与心律电子杂志, 2018, 06(02): 95-98.
[15]	李世浩, 王玉姣, 李子豪, 吴彬, 盛银良, 齐宇. 单细胞转录组分析巨噬细胞帽状蛋白对食管鳞癌细胞增殖和转移的影响[J]. 中华胸部外科电子杂志, 2023, 10(02): 98-105.

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