NAF1 基因对舌鳞状细胞癌细胞增殖转移能力的影响

doi:10.3877/cma.j.issn.1674-1366.2014.06.003

目的

使用小干扰RNA（siRNA）干扰舌鳞状细胞癌Tca8113 细胞中营养缺乏自噬因子1（NAF1）的表达，观察对NAF1 基因的沉默效果，并测定沉默后Tca8113 细胞生长增殖侵袭能力的变化。

方法

建立小干扰RNA（si-NAF1）组、阴性对照（si-NC）组、对照（vector）组。采用反转录聚合酶链反应（RT-PCR）法和Western blotting 法检测NAF1、细胞周期素D1（cyclin D1）、基质金属蛋白酶2（MMP-2）的表达。 MTT 实验检测细胞增殖能力，平板克隆形成实验检测细胞克隆形成能力，Transwell 法观察各组细胞侵袭能力变化。

结果

与vector 组相比，NAF1-siRNA 干预Tca8113 细胞后，si-NAF1 组NAF1 的mRNA 和蛋白表达水平都明显降低（χ²=25.65，t=-17.1，P ＜0.05），cyclin D1、MMP-2 蛋白表达水平降低（t_cyclin_D1=-14.7，t_MMP-2=-9.6，P ＜0.05），细胞增殖能力明显降低（t=-36.77，P ＜0.05），克隆形成能力明显减弱（t=-12.33，P ＜0.05），侵袭能力明显降低，si-NAF1 组穿过Transwell 膜的细胞少于vector 组。

结论

通过siRNA 技术降低NAF1 表达可能通过降低cyclin D1 水平抑制舌鳞状细胞癌Tca8113 细胞的增殖能力，通过影响MMP-2 蛋白表达水平，抑制Tca8113 细胞的侵袭能力。

关键词: 舌肿瘤, 肿瘤, 鳞状细胞, RNA 干扰, 营养缺乏自噬因子1

Objective

To investigate the inhibitory effect of small interfering RNA （siRNA） on the expression of nutrient-deprivation autophagy factor-1 （NAF1） in human tongue cancer Tca8113 cell line via transfected with the special siRNA. The biological behaviors， including cell proliferation and metastasis of the transduced cells were investigated as well.

Methods

The cultured Tca8113 cells were divided into three groups including si-NAF1 group， si-NC group and the vector group. MTT assay and plate cloning formation assay were used to identify the effect of NAF1-siRNA on the cell proliferation.Transwell assay.was used to investigate the invasion capability of the Tca8113 cells. The RNA and protein levels of functional biomarkers such as cyclin D1 and MMP-2 were detected through RT-PCR and Western blot assay.

Results

NAF1 expression in Tca8113 cells transfected with NAF1-siRNA was significantly down regulated at both the RNA and protein levels compared with those in normal Tca8113 cells （χ²=25.65，t=-17.1，P ＜0.05）， accompany with the decreases of cyclin D1 and MMP-2 protein（t_cyclin_D1=-14.7，t_MMP-2=-9.6，P ＜0.05）. The proliferation and cloning formation of Tca8113 cells were obviously inhibited in si-NAF1 group compared with the vector group （t=-36.77，t=-12.33，P＜0.05）. The cell invasion of Tca8113 cells was obviously inhibited in si-NAF1 group compared with the vector group.

Conclusion

Down regulation of NAF1 inhibited tongue cancer cells proliferation and metastasis， which might mediated via cyclin D1 and MMP-2 protein.

Key words: Tongue neoplasms, Neoplasms， squamous cell, RNA interference, Nutrientdeprivation autophagy factor-1deprivation autophagy factor-1

表1 引物序列

基因	引物序列
NAF1	F：5'-ATGCTTTTTCATCATGTTCAACT-3'
	R：5'-GCATCAGGGCTTTCAATGCAC-3'
β-actin	F：5'-TCAATGATTTGGCTACAGCA-3'
	R：5'-AGATCATGTACATGGCAACTG-3'

表1 引物序列

基因	引物序列
NAF1	F：5'-ATGCTTTTTCATCATGTTCAACT-3'
	R：5'-GCATCAGGGCTTTCAATGCAC-3'
β-actin	F：5'-TCAATGATTTGGCTACAGCA-3'
	R：5'-AGATCATGTACATGGCAACTG-3'

图1 舌鳞癌细胞系Tca8113 细胞NAF1 mRNA 表达水平的比较注：与vector 组相比，^aP ＜0.05

图2 舌鳞癌细胞系Tca8113 细胞NAF1 蛋白NAF1、cyclin D1、MMP-2 蛋白表达的Western blot 检测注：与vector 组相比，^aP ＜0.05

图3 舌鳞癌细胞系Tca8113 细胞NAF1、cyclin D1、MMP-2蛋白表达水平的比较注：与vector 组相比，^aP ＜0.05

图4 舌鳞癌细胞系Tca8113 细胞生存的比较注：与vector 组相比，^aP ＜0.05

图5 舌鳞癌细胞系Tca8113 细胞平板克隆形成情况

图6 舌鳞癌细胞系Tca8113 细胞克隆形成能力的比较注：与vector 组相比，^aP ＜0.05

图7 舌鳞癌细胞系Tca8113 细胞侵袭能力的比较（Transwell法，结晶紫染色，光镜，×400）

［1］	李莎莎，周旋，张浏阳，等. 口腔舌癌与口底癌患者预后的比较研究［J］. 天津医药， 2013，41（6）：523-526.
［2］	王玉丽，彭歆，罗奕. 前臂皮瓣修复舌癌术后舌缺损患者的生存质量评价［J］. 中华口腔医学杂志， 2011，46（1）：27-30.
［3］	何升腾，焦晓辉，刘欧胜，等. 1171 例舌癌的治疗与预后分析［J］. 重庆医学， 2014，43（6）：671-673.
［4］	刘三霞，胡敏. p53 基因治疗口腔癌的研究进展［J］. 中华口腔医学杂志， 2012，47（9）：569-572.
［5］	Huse JT， Holland EC. Targeting brain cancer： advances in the molecular pathology of malignant glioma and medulloblastoma［J］. Nat Rev Cancer， 2010，10（5）：319-331.
［6］	朱锐，姜小云，宋晓陵，等. 上皮钙黏蛋白与β-连环素在舌鳞状细胞癌中的表达及其与预后的关系［J］. 中华口腔医学杂志， 2010，45（5）：295-298.
［7］	Jones MA，Amr S，Ferebee A，et al. Genetic studies in Drosophila and humans support a model for the concerted function of CISD2， PPT1 and CLN3 in disease［J］. Biology open， 2014，3（5）：342-352.
［8］	Sohn YS， Tamir S， Song L， et al. NAF-1 and mitoNEET are central to human breast cancer proliferation by maintaining mitochondrial homeostasis and promoting tumor growth［J］. Proc Natl Acad Sci U S A， 2013，110（36）：14676-14681.
［9］	Tamir S， Zuris JA， Agranat L， et al. Nutrient-deprivation autophagy factor-1 （NAF-1）： biochemical properties of a novel cellular target for anti-diabetic drugs ［J］. PLoS One， 2013，8（5）：e61202.
［10］	Chai JC， Park S， Seo H， et al. Identification of cancer-specific biomarkers by using microarray gene expression profiling ［J］.BioChip Journal， 2013，7（1）：57-62.
［11］	Jia H， Saito K， Aw W， et al. Transcriptional profiling in rats and an ex vivo analysis implicate novel beneficial function of egg shell membrane in liver fibrosis ［J］. J Functional Foods，2013，5（4）：1611-1619.
［12］	Guo Y， Chen W， Wang W， et al. Simultaneous diagnosis and gene therapy of immuno-rejection in rat allogeneic heart transplantation model using a T-cell-targeted theranostic nanosystem［J］. ACS Nano， 2012，6（12）：10646-10657.
［13］	Guo Y， Liang X， Lu M， et al. Mammalian target of rapamycin as a novel target in the treatment of hepatocellular carcinoma［J］. Hepatogastroenterology， 2010，57（101）：913-918.
［14］	Ye X，Guo Y，Zhang Q，et al. βKlotho suppresses tumor growth in hepatocellular carcinoma by regulating Akt/GSK-3β/Cyclin D1 signaling pathway［J］. PloS One， 2013，8（1）：e55615.
［15］	Wang C， Guo Y， Wang J， et al. The suppressive role of SOX7 in hepatocarcinogenesis［J］. PloS One， 2014，9（5）：e97433.
［16］	周肖，程爱兰，甘润良. 线粒体细胞色素C 氧化酶与肿瘤［J］.中华病理学杂志， 2012，41（6）：425-427.
［17］	Chang NC， Nguyen M， Bourdon J， et al. Bcl-2-associated autophagy regulator Naf-1 required for maintenance of skeletal muscle［J］. Hum Mol Genet， 2012，21（10）：2277-2287.
［18］	伍丽静，刘路，陈丽虹，等. 干扰八聚体转录结合因子4A 对人牙髓细胞增殖与多向分化能力的影响［J］. 中华口腔医学杂志， 2013，48（11）：672-678.
［19］	Spengler RM，Oakley CK，Davidson BL. Functional microRNAs and target sites are created by lineage-specific transposition［J］.Hum Mol Genet， 2014，23（7）：1783-1793.
［20］	陶英杰，任玉，董家斌，等. 反义微小RNA-21 寡核苷酸抑制Tb3.1 人舌鳞状细胞癌增殖的体外研究［J］. 中华口腔医学杂志， 2011，46（2）：79-83.
［21］	刘晖，王月红，唐瞻贵，等. 克霉唑对口腔鳞状细胞癌生长抑制作用的研究［J］. 中华口腔医学杂志， 2010，45（9）：545-548.
［22］	黄健，李德怀. RNA 干扰双泛素对舌鳞状细胞癌细胞生物学行为的影响［J］. 中华口腔医学杂志， 2011，46（10）：604-607.
［23］	刘爱芹，李莎莎，周旋，等. 信号传导及转录激活因子调控微RNA-21 影响人舌鳞状细胞癌细胞侵袭能力的体外研究［J］.中华口腔医学杂志， 2013，48（9）：539-544.
［24］	陈萍，薛毅，袁东辉. 龈沟液中基质金属蛋白酶8 及基质金属蛋白酶组织抑制物1 水平与牙周病的关系［J］. 中华口腔医学杂志， 2011，46（z1）：27-30.
［25］	肖丙秀，郭俊明，钟久昌. 微小RNA 对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖的影响［J］. 中华口腔医学杂志，2010，45（3）：152-154.
［26］	周峻，何勇，董绍忠，等.RhoA 小干扰RNA 对舌癌细胞Tca8113增殖、侵袭影响的体外实验［J］. 中华口腔医学杂志， 2010，45（9）：520-524.

[1]	韩萌萌, 冯雪园, 马宁. 乳腺癌改良根治术后桡神经损伤1例[J/OL]. 中华普外科手术学杂志(电子版), 2025, 19(01): 117-118.
[2]	李国新, 陈新华. 全腹腔镜下全胃切除术食管空肠吻合的临床研究进展[J/OL]. 中华普外科手术学杂志(电子版), 2025, 19(01): 1-4.
[3]	陈方鹏, 杨大伟, 金从稳. 腹腔镜近端胃癌切除术联合改良食管胃吻合术重建His角对术后反流性食管炎的效果研究[J/OL]. 中华普外科手术学杂志(电子版), 2025, 19(01): 15-18.
[4]	许杰, 李亚俊, 韩军伟. 两种入路下腹腔镜根治性全胃切除术治疗超重胃癌的效果比较[J/OL]. 中华普外科手术学杂志(电子版), 2025, 19(01): 19-22.
[5]	韦锦焕, 陈旭, 卢军, 陈炜, 罗俊航. 机器人辅助腹腔镜肾部分切除术中逆行切除技术在治疗巨大复杂肾癌中的应用[J/OL]. 中华腔镜泌尿外科杂志(电子版), 2025, 19(01): 27-30.
[6]	张浩洋, 凌志新, 许爽, 陈浩, 欧阳骏. 肾肿瘤评分系统的研究进展[J/OL]. 中华腔镜泌尿外科杂志(电子版), 2025, 19(01): 88-94.
[7]	蒋爽, 张昊. 原发性输尿管小细胞神经内分泌癌一例报告并文献复习[J/OL]. 中华腔镜泌尿外科杂志(电子版), 2025, 19(01): 111-115.
[8]	冯帆, 马文亮, 董翔, 潘骏, 甘卫东, 郭宏骞. 前后结合入路机器人辅助根治性前列腺切除术早期疗效分析[J/OL]. 中华腔镜泌尿外科杂志(电子版), 2025, 19(01): 83-87.
[9]	李起, 豆明辉, 贾蓬勃, 王新团, 雷达, 李军辉, 杨瑞, 杨成林, 张小弟, 郝琪伟, 耿西林, 张煜, 刘益民, 郭智华, 姚春和, 王天翊, 蔡志强, 司书宾, 杨文彬, 耿智敏, 张东. 基于随机森林算法构建胆囊肿瘤性息肉发生的预测模型[J/OL]. 中华肝脏外科手术学电子杂志, 2025, 14(01): 46-52.
[10]	余承澍, 刘红枝, 林科灿, 林起柱, 黄霆峰, 周伟平, 程张军, 楼健颖, 郑树国, 毕新宇, 王剑明, 郭伟, 李富宇, 王坚, 郑亚民, 李敬东, 程石, 曾永毅. 肝内胆管细胞癌术后极早期复发的危险因素[J/OL]. 中华肝脏外科手术学电子杂志, 2025, 14(01): 53-59.
[11]	董思帆, 安仕琪, 刘起帆, 王楚风, 蒋安. 光动力疗法在晚期胆管癌姑息性治疗中的安全性和疗效Meta 分析[J/OL]. 中华肝脏外科手术学电子杂志, 2025, 14(01): 68-73.
[12]	李家军, 万思乐, 陆朝阳. 肝中心型肿瘤切除术后胆漏临床分析[J/OL]. 中华肝脏外科手术学电子杂志, 2025, 14(01): 87-91.
[13]	孙志鹏, 束斌, 王良, 黄鑫, 王鹏飞, 李广欣, 王小娟, 黎功, 杨世忠. 放疗联合靶向免疫新辅助治疗肝内胆管细胞癌的安全性与疗效[J/OL]. 中华肝脏外科手术学电子杂志, 2025, 14(01): 92-96.
[14]	邱枫, 杨天池, 韩威. 腹腔镜超声引导下射频消融治疗肝脏恶性肿瘤的安全性与疗效分析[J/OL]. 中华肝脏外科手术学电子杂志, 2025, 14(01): 102-106.
[15]	时吉庆, 李坤, 陈一峰. 罕见巨大胆总管囊肿术后九年新发肝脏肿瘤一例[J/OL]. 中华肝脏外科手术学电子杂志, 2025, 14(01): 126-127.

阅读次数

全文

摘要

选择文件类型/文献管理软件名称

选择包含的内容

Influence of nutrient-deprivation autophagy factor-1 gene on the proliferation and metastasis behavior of human tongue cancer cells

模态框（Modal）标题

选择文件类型/文献管理软件名称

选择包含的内容

Influence of nutrient-deprivation autophagy factor-1 gene on the proliferation and metastasis behavior of human tongue cancer cells