miR-181a 对唾液腺腺样囊性癌细胞株侵袭和迁移的影响

doi:10.3877/cma.j.issn.1674-1366.2014.06.002

目的

研究与唾液腺腺样囊性癌（SACC）侵袭转移相关的微小RNA（miRNA），探讨miR-181a 对SACC 侵袭和迁移的影响。

方法

选择1 对不同侵袭迁移能力的SACC 细胞株（SACC-LM/SACC-83），采用miRNA 芯片技术分析细胞株中miRNA 的表达差异，初步筛选出与SACC 侵袭转移相关的miRNA。再通过过表达或沉默细胞株中miR-181a 的表达，进行细胞划痕和Transwell 侵袭实验检测细胞的侵袭、迁移能力。采用SPSS 17.0 软件对数据进行统计学处理，以P ＜0.05 为差异具有统计学意义。

结果

miRNA 芯片结果显示，高侵袭迁移能力的SACC 细胞株miR-181a 表达明显下降。细胞划痕和Transwell 实验结果表明，SACC-LM 细胞转染miR-181a mimics 后体外侵袭迁移能力明显受到抑制（t=-5.235，P ＜0.05）；SACC-83 细胞转染miR-181a LNA 后体外侵袭迁移能力有所提高（t=7.713，P ＜0.05）。

结论

不同侵袭迁移能力的SACC 细胞株中存在多种miRNA 的差异表达。 miR-181a 的表达降低可能导致SACC 细胞侵袭迁移能力的增强。

关键词: 微小RNA, miR-181a, 唾液腺腺样囊性癌, 侵袭, 迁移

Objective

To screen microRNA（miRNA） related to the cell invasion and metastasis in salivary adenoid cystic carcinoma （SACC） cell lines and investigate the effect of miR-181a in the cell invasion and migration in SACC.

Methods

A paired SACC cell lines（SACC-LM/SACC-83） with different cell invasive and migrative ability were chosen. MiRNA array was performed to analyze the different expression of miRNAs in the paired SACC cell lines and identify miRNAs related to the cell invasion and metastasis. Then SACC-LM and SACC-83 were transfected with miR-181a mimics and miR-181a LNA respectively. Wound healing assay and transwell assay were used to observe the changes of the cell migration and invasion ability after transfection. Data were analyzed using the Statistical Package for the Social Science （SPSS）， Version 17.0. For all statistical analyses， P ＜0.05 was considered statistically significant.

Results

MiRNA array showed that the expression of miR-181a in SACC-LM cells was lower than SACC-83 cells. Wound healing assay and transwell assay showed that ectopic transfection of the miR-181a mimics into the SACC-LM cells led to inhibition in the cell invasion and migration （t=-5.235，P ＜0.05）. When the SACC-83 cells were treated with miR-181a LNA， an improvement in the cell invasive and migrative ability was observed （t=7.713，P ＜0.05）.

Conclusions

There are various miRNAs expressing differently in SACC cell lines with divergent invasive and migrative ability. Underexpression of miR-181a could enhance the cell invasive and migrative ability of SACC cells.

Key words: MicroRNA, MiR-181a, Salivary adenoid cystic carcinoma, Invasion, Migration

图1 SACC 细胞株提取物总RNA 的电泳结果注：1 为SACC-83；2 为SACC-LM

表1 SACC 细胞株提取物总RNA 的质检结果

细胞株	A ₂₆₀	A ₂₈₀	A ₂₆₀/A₂₈₀	总量（μg）
SACC-83	0.364	0.172	2.10	29.12
SACC-LM	0.178	0.085	2.01	14.24

表1 SACC 细胞株提取物总RNA 的质检结果

细胞株	A ₂₆₀	A ₂₈₀	A ₂₆₀/A₂₈₀	总量（μg）
SACC-83	0.364	0.172	2.10	29.12
SACC-LM	0.178	0.085	2.01	14.24

图2 SACC-LM/SACC-83 miRNA 芯片图注：图2A 为SACC-LM 细胞miRNA 芯片图；图2B 为SACC-83细胞miRNA 芯片图

图3 部分已命名的miRNA 分子在SACC-LM/SACC-83 的表达差异

表2 SACC-LM 与SACC-83 样品间差异存在统计学意义的miRNA 数据表

miRNA	SACC-83组均数	SACC-LM组均数	校正SACC-83组	校正SACC-LM组	SACC-LM/SACC-83
1529-shuf-has-mir-93	478	656	6.966	11.960	1.72
1532-rev-mir-150	794	1202	7.130	13.830	1.94
1565-shuf-mir-34c	345	254	8.107	8.313	1.03
hsa-miR-105	494	200	11.130	6.183	0.56
hsa-miR-135a	578	407	9.429	8.441	0.90
hsa-miR-148a	365	116	10.950	5.389	0.49
hsa-miR-15b	340	120	10.310	5.680	0.55
hsa-miR-16	449	145	11.700	5.461	0.47
hsa-miR-17	456	301	9.122	7.978	0.87
hsa-miR-181a	564	162	13.080	5.189	0.40
hsa-miR-181b	405	131	11.290	5.450	0.48
hsa-miR-181c	295	102	9.822	5.626	0.57
hsa-miR-181d	341	133	10.000	5.975	0.60
hsa-miR-185	656	304	11.410	6.787	0.59
hsa-miR-186	314	128	9.567	6.113	0.64
hsa-miR-202	1306	1	114.200	0.235	0.00
hsa-miR-21	615	217	12.440	5.822	0.47
hsa-miR-214	984	454	12.350	7.132	0.58
hsa-miR-216b	238	289	6.071	10.630	1.75
hsa-miR-221	298	110	9.681	5.805	0.60
hsa-miR-25	1047	990	9.072	11.000	1.21
hsa-miR-27b	512	489	8.157	9.858	1.21
hsa-miR-296-3p	2170	1793	10.580	11.320	1.07
hsa-miR-29a	390	142	10.710	5.796	0.54
hsa-miR-30c-2	362	95	11.570	4.906	0.42
hsa-miR-335	448	358	8.460	8.835	1.04
hsa-miR-338-5p	351	4	29.980	0.911	0.03
hsa-miR-363	272	308	6.488	10.300	1.59
hsa-miR-383	403	313	8.318	8.629	1.04
hsa-miR-421	391	384	7.567	9.770	1.29
hsa-miR-452	545	417	9.010	8.784	0.97
hsa-miR-487a	421	411	7.725	9.795	1.27
hsa-miR-503	363	336	7.577	9.417	1.24
hsa-miR-510	369	195	9.282	7.011	0.76
hsa-miR-513-5p	620	403	9.885	8.131	0.82
hsa-miR-548a-5p	330	270	7.702	8.773	1.14
hsa-miR-548b-5p	371	311	7.907	8.940	1.13
hsa-miR-548c-3p	348	19	18.420	2.186	0.12
hsa-miR-568	365	293	7.988	8.733	1.09
hsa-miR-629	346	127	10.250	5.794	0.57
hsa-miR-630	928	960	8.586	11.370	1.32
hsa-miR-638	1111	759	10.530	9.196	0.87
hsa-miR-674	1857	860	13.350	7.954	0.60
hsa-miR-877	756	458	10.580	8.002	0.76
hsa-miR-890	455	1	55.080	0.354	0.01
hsa-miR-892b	265	339	6.174	10.960	1.78
hsa-miR-923	5209	5919	10.140	15.260	1.51
hsa-miR-93	354	235	8.470	7.884	0.93
hsa-miR-933	771	160	16.040	4.458	0.28
hsa-miR-944	539	1	62.050	0.332	0.01

表2 SACC-LM 与SACC-83 样品间差异存在统计学意义的miRNA 数据表

miRNA	SACC-83组均数	SACC-LM组均数	校正SACC-83组	校正SACC-LM组	SACC-LM/SACC-83
1529-shuf-has-mir-93	478	656	6.966	11.960	1.72
1532-rev-mir-150	794	1202	7.130	13.830	1.94
1565-shuf-mir-34c	345	254	8.107	8.313	1.03
hsa-miR-105	494	200	11.130	6.183	0.56
hsa-miR-135a	578	407	9.429	8.441	0.90
hsa-miR-148a	365	116	10.950	5.389	0.49
hsa-miR-15b	340	120	10.310	5.680	0.55
hsa-miR-16	449	145	11.700	5.461	0.47
hsa-miR-17	456	301	9.122	7.978	0.87
hsa-miR-181a	564	162	13.080	5.189	0.40
hsa-miR-181b	405	131	11.290	5.450	0.48
hsa-miR-181c	295	102	9.822	5.626	0.57
hsa-miR-181d	341	133	10.000	5.975	0.60
hsa-miR-185	656	304	11.410	6.787	0.59
hsa-miR-186	314	128	9.567	6.113	0.64
hsa-miR-202	1306	1	114.200	0.235	0.00
hsa-miR-21	615	217	12.440	5.822	0.47
hsa-miR-214	984	454	12.350	7.132	0.58
hsa-miR-216b	238	289	6.071	10.630	1.75
hsa-miR-221	298	110	9.681	5.805	0.60
hsa-miR-25	1047	990	9.072	11.000	1.21
hsa-miR-27b	512	489	8.157	9.858	1.21
hsa-miR-296-3p	2170	1793	10.580	11.320	1.07
hsa-miR-29a	390	142	10.710	5.796	0.54
hsa-miR-30c-2	362	95	11.570	4.906	0.42
hsa-miR-335	448	358	8.460	8.835	1.04
hsa-miR-338-5p	351	4	29.980	0.911	0.03
hsa-miR-363	272	308	6.488	10.300	1.59
hsa-miR-383	403	313	8.318	8.629	1.04
hsa-miR-421	391	384	7.567	9.770	1.29
hsa-miR-452	545	417	9.010	8.784	0.97
hsa-miR-487a	421	411	7.725	9.795	1.27
hsa-miR-503	363	336	7.577	9.417	1.24
hsa-miR-510	369	195	9.282	7.011	0.76
hsa-miR-513-5p	620	403	9.885	8.131	0.82
hsa-miR-548a-5p	330	270	7.702	8.773	1.14
hsa-miR-548b-5p	371	311	7.907	8.940	1.13
hsa-miR-548c-3p	348	19	18.420	2.186	0.12
hsa-miR-568	365	293	7.988	8.733	1.09
hsa-miR-629	346	127	10.250	5.794	0.57
hsa-miR-630	928	960	8.586	11.370	1.32
hsa-miR-638	1111	759	10.530	9.196	0.87
hsa-miR-674	1857	860	13.350	7.954	0.60
hsa-miR-877	756	458	10.580	8.002	0.76
hsa-miR-890	455	1	55.080	0.354	0.01
hsa-miR-892b	265	339	6.174	10.960	1.78
hsa-miR-923	5209	5919	10.140	15.260	1.51
hsa-miR-93	354	235	8.470	7.884	0.93
hsa-miR-933	771	160	16.040	4.458	0.28
hsa-miR-944	539	1	62.050	0.332	0.01

图4 SACC-LM/SACC-83 细胞转染效率图（倒置荧光显微镜 ×40）注：图4A 为转染mimics NC-FAM 6 h 后SACC-LM 细胞（暗视野）；图4B 为转染mimics NC-FAM 6 h 后SACC-LM 细胞（明视野）；图4C 为转染miR-181a LNA 6 h 后SACC-83 细胞（暗视野）；图4D 为转染miR-181a LNA 6 h 后SACC-83 细胞（明视野）

图5 SACC-LM 细胞转染miR-181a mimics 后侵袭迁移能力下降注：图5A 为唾液腺腺样囊性癌细胞株SACC-LM 转染miR-181a mimics 24 h 后，mimics NC 组划痕区变窄，miR-181a mimics 组划痕依然明显（×40）；图5B 为miR-181a mimics 组和mimics NC 组穿膜细胞图（×100），miR-181a mimics 组穿膜细胞数目显著下降；图5C 为miR-181a mimics 组和mimics NC 组穿膜细胞数统计学分析，^aP ＜0.05

图6 SACC-83 细胞转染miR-181a LNA 后侵袭迁移能力增强注：图6A 为唾液腺腺样囊性癌细胞株SACC-83 转染miR-181a LNA 24 h 后，miR-181a LNA 组划痕区变窄，LNA NC 组划痕依然明显（×40）；图6B 为miR-181a LNA 组和LNA NC 组穿膜细胞图（×100），miR-181a LNA 组穿膜细胞数目增加；图6C 为miR-181a LNA 组和LNA NC 组穿膜细胞数统计学分析，^aP ＜0.05

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The effect of miR-181a on invasion and migration of salivary adenoid cystic carcinoma

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