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中华口腔医学研究杂志(电子版)

中华口腔医学研究杂志(电子版) ›› 2013, Vol. 07 ›› Issue (02) : 105 -111. doi: 10.3877/cma.j.issn.1674-1366.2013.02.005

基础研究

AFMK 对大鼠牙乳头细胞增殖和分化的影响
卢艳红1, 付深利1, 何依帆1, 周红玉1, 黄芳1,†(), 刘永亮1, 高志雄1   
  1. 1. 510055 广州，中山大学光华口腔医学院·附属口腔医院，广东省口腔医学重点实验室
  • 收稿日期:2012-11-13 出版日期:2013-04-01
  • 通信作者: 黄芳
  • 基金资助:
    广东省科技计划（2008B030301102）2012年中山大学实验室开放基金（KF201221）

The effects of AFMK on proliferation and differentiation of rat dental papilla cells

Yanhong LU1, Shen-li FU1, Yi-fan HE1, Hong-yu ZHOU1, Fang HUANG1,†(), Yong-liang LIU1, Zhi-xiong GAO1   

  1. 1. Guanghua School of Stomatology，Hospital of Stomatology，Sun Yat-sen University，Guangdong Provincial Key Laboratory of Stomatology，Guangzhou 510055，China
  • Received:2012-11-13 Published:2013-04-01
  • Corresponding author: Fang HUANG
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引用本文：

卢艳红, 付深利, 何依帆, 周红玉, 黄芳, 刘永亮, 高志雄. AFMK 对大鼠牙乳头细胞增殖和分化的影响[J/OL]. 中华口腔医学研究杂志(电子版), 2013, 07(02): 105-111.

Yanhong LU, Shen-li FU, Yi-fan HE, Hong-yu ZHOU, Fang HUANG, Yong-liang LIU, Zhi-xiong GAO. The effects of AFMK on proliferation and differentiation of rat dental papilla cells[J/OL]. Chinese Journal of Stomatological Research(Electronic Edition), 2013, 07(02): 105-111.

目的

探讨N1-乙酰基-N2-甲酰基-5-甲氧基犬尿氨酸（AFMK）对大鼠牙乳头细胞（RDPCs）增殖和分化的影响。

方法

选用新生SD 大鼠，体外分离培养RDPCs。 取第4 代RDPCs，分别在普通培养条件和矿化诱导条件下，采用MTT 比色法检测不同浓度AFMK 对RDPCs 增殖的影响；矿化诱导条件下，AFMK 刺激RDPCs 后，PNPP 偶氮法、茜素红染色法和免疫组化法分别检测RDPCs的碱性磷酸酶（ALP）活性、矿化基质形成和牙本质涎蛋白的表达。

结果

在普通培养条件下，加药第2、3、4 天后，AFMK 低、高浓度组的吸光度（A）值均低于对照组（P＜0.05）。 在矿化诱导条件下：（1）加药第2、3、4 天后，AFMK 低、高浓度组的A 值均高于对照组（P＜0.05）；（2）AFMK 高浓度组ALP 活性高于对照组（P＜0.05）；（3）AFMK 高浓度组茜素红染色A 值高于对照组（P＜0.05）；（4）牙本质涎蛋白染色在对照组呈弱阳性，在AFMK 高浓度组呈强阳性。

结论

普通培养条件下，AFMK 抑制RDPCs 的增殖；矿化诱导条件下，AFMK 则促进其增殖和分化。

关键词: N1-乙酰基-N2-甲酰基-5-甲氧基犬尿氨酸, 牙乳头细胞, 增殖, 分化

Objective

To investigate the effects of N1-acetyl-N2-formyl-5-methoxy-kynuramine（AFMK） on the proliferation and differentiation of rat dental papilla cells （RDPCs）.

Methods

Dental papilla cells of neonatal rats were isolated and cultured in vitro. Different concentrations of AFMK were added into the common and osteogenic medium，while the proliferation of RDPCs was examined by MTT assay. ALP activity was measured by analyzing the rate of PNPP hydrolysis. Osteogenic differentiation capacity was determined by alizarin red staining，the expression of dentin sialoprotein （DSP） in RDPCs was detected by immunocytochemistry.

Results

In common medium，the result of MTT assay showed that the absorbance （A） value of the AFMK groups with various concentration were lower than the control group on day 2，3 and 4 （P＜0.05）. In osteogenic culture induction condition，（1）The result of MTT assay showed that the A value of the AFMK groups with various concentration were higher than the control group on day 2，3 and 4 （P＜0.05）； （2）The ALP activaty of high concentration AFMK group was higher than that of the control group （P＜0.05）；（3）The alizarin red staining showed that the high concentration AFMK group formed more mineralized matrix than control group （P＜0.05）；（4）The immunocytochemistry staining showed that positive staining of DSP was found from the high concentration AFMK group compared with control group.

Conclusion

AFMK inhibitded the proliferation of RDPCs in normal culture condition，whereas promoted proliferation and differentiation in osteogenic culture condition.

Key words: N1-acetyl-N2-formyl-5-methoxy-kynuramine, Dental papilla cells, Proliferation, Differentiation
图1 体外大鼠牙乳头细胞的分离培养（倒置相差显微镜×50） A：原代培养第5 天，大量细胞从组织块爬出；B：第1 代RDPCs；C：第4 代RDPCs
图2 体外培养的大鼠牙乳头细胞来源鉴定（DAB ×100） A：大鼠牙乳头细胞波形丝蛋白染色阳性；B：大鼠牙乳头细胞角蛋白染色阴性
图3 普通培养条件下，AFMK 对RDPCs 增殖的影响 与对照组比较，aP＜0.05
图4 矿化诱导培养条件下，AFMK 对RDPCs 增殖的影响 与对照组比较，aP＜0.05；与褪黑素组比较，bP＜0.05
图5 AFMK 对RDPCs 的ALP 活性的影响 与普通对照组比较，aP＜0.05；与矿化对照组比较，bP＜0.05
图6 AFMK 对RDPCs 矿化基质形成的影响 A：普通对照组，无明显矿化结节形成（茜素红 ×50）；B：矿化对照组，见少量矿化结节形成（茜素红 ×50）；C：AFMK 低浓度组，见少量矿化结节形成（茜素红 ×50）；D：AFMK 高浓度组，见较多矿化结节形成（茜素红 ×50）；E：各组的A 值（与普通对照组比较，aP＜0.05；与矿化对照组比较，bP＜0.05）
图7 AFMK 对RDPCs 的DSP 表达的影响（SP ×50） A：阴性对照组，DSP 染色阴性；B：矿化对照组，刺激10 d 后，个别细胞出现单侧较长的突起，DSP 表达弱阳性，胞浆呈棕黄色颗粒；C：AFMK 高浓度组，AFMK 刺激10 d 后，个别细胞出现单侧较长的突起；DSP 表达强阳性，胞浆呈棕黄色颗粒
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