沉默Beclin1 基因抑制自噬促进舌鳞状细胞癌细胞增殖及侵袭转移

doi:10.3877/cma.j.issn.1674-1366.2013.01.003

中华口腔医学研究杂志(电子版) ›› 2013, Vol. 07 ›› Issue (01) : 10 -14. doi: 10.3877/cma.j.issn.1674-1366.2013.01.003

基础研究

沉默Beclin1 基因抑制自噬促进舌鳞状细胞癌细胞增殖及侵袭转移

翁军权¹, 唐海阔¹, 王成¹, 王雅雯¹, 黄秋雨¹, 侯劲松¹^,^†(

)

^1. 510055 广州，中山大学光华口腔医学院·附属口腔医院，广东省口腔医学重点实验室

收稿日期:2012-11-14 出版日期:2013-02-01
通信作者: 侯劲松
基金资助:
广东省自然科学基金(10151008901000025)广东省科技计划(2009B050700024、2009B060700 096)广州市科技计划项目对外科技合作专项(2012J5100008)

Silence of Beclin1 gene downregulate autophagic activity and promote the proliferation，invasion and migration in tongue squamous cell carcinoma cell line

Jun-quan WENG¹, Hai-kuo TANG¹, Cheng WANG¹, Ya-wen WANG¹, Qiu-yu HUANG¹, Jin-song HOU¹^,^†()

^1. Guanghua School of Stomatology，Hospital of Stomatology，Sun Yat-sen University，Guangdong Provincial Key Laboratory of Stomatology，Guangzhou 510055，China

Received:2012-11-14 Published:2013-02-01
Corresponding author: Jin-song HOU

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目的

探讨抑制自噬基因Beclin1 表达对舌鳞状细胞癌（以下简称舌鳞癌）细胞增殖及侵袭转移的影响，了解舌鳞癌侵袭转移的调控机制。

方法

利用RNAi 技术，针对人cDNA 序列设计Beclin1 干扰序列，用脂质体Lipo2000 包裹后转染至舌鳞癌UM2 细胞。实验设空白对照组、脂质体2000（Lipo2000）组、阴性siRNA 组和Beclin1 siRNA 组，通过蛋白印迹法检测Beclin1、LC3的表达变化；CCK-8 法检测细胞增殖能力变化；Transwell 小室检测细胞迁移和侵袭能力改变；SPSS 13.0 统计软件进行数据分析。

结果

转染Beclin1 siRNA 对UM2 细胞Beclin1 有显著敲减作用（P＜0.05），自噬标记蛋白LC3-Ⅱ的表达明显降低（P＜0.05），细胞增殖较对照组增快（P＜0.05），细胞迁移和侵袭转移能力明显增强。

结论

沉默Beclin1 表达可下调舌鳞癌细胞自噬水平，并促进舌鳞癌细胞增殖和侵袭能力。

关键词: RNA 干扰, 舌鳞癌细胞, Beclin1, 自噬, 肿瘤侵袭力

Objective

To investigate the effect of Beclin1 siRNA on proliferation，invasion and migration and their related mechanisms in tongue squamous cell carcinoma （TSCC） cell line.

Methods

Used the technology of RNA interference （RNAi） to cut down Beclin1 expression，targeting the coding sequence of human Beclin1 gene，and then transfected into UM2 cells by Lipofectmine 2000. UM2 cells were cultured and divided into 4 groups： blank control group，Lipo2000 control group，nonspecific siRNA group and Beclin1 siRNA group. Then，Western blot were performed to examine the expression of Beclin1 and LC3. CCK-8 assay were used to evaluate cell proliferation. Transwell assay was carried out to assess cell migration and invasion.

Results

The Beclin1 protein expression was significantly decreased after Beclin1 siRNA transfection （P＜0.05）. Meanwhile，The expression of LC3-Ⅱprotein was significantly lower than the control group 72 h after transfection （P＜0.05）. Compared to the control group，cell proliferation was significantly increased （P＜0.05）. Invasion and migration ability were also enhanced in UM2 cell transfected with Beclin1 siRNA （P＜0.05）.

Conclusion

Downregulation of Beclin1 can downregulate autophagical activity and promote the proliferation and invasiveness of TSCC cell line.

Key words: RNA interference, Tongue squamous cell carcinoma, Beclin1, Autophagy, Neoplasm invasion

图1 siRNA 作用UM2 细胞72 h 后Beclin1、LC3 的表达变化 A：空白对照组；B：Lipo2000 组；C：阴性对照组；D：siRNA 组

图2 UM2 细胞转染Beclin1 siRNA 后的增殖能力变化

图3 Beclin1 基因干扰后UM2 细胞迁移能力比较（DAPI × 100） A：空白对照组；B：Lipo2000 组；C：阴性对照组；D：siRNA 组

图4 Beclin1 基因干扰后UM2 细胞侵袭能力的变化（DAPI × 100） A：空白对照组；B：Lipo2000 组；C：阴性对照组；D：siRNA 组

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