环孢素A 联合脂多糖对牙周膜成纤维细胞增殖的影响

doi:10.3877/cma.j.issn.1674-1366.2011.05.004

目的

探讨环孢素A（CsA）联合牙龈卟啉单胞菌脂多糖（Pg-LPS）对人牙周膜成纤维细胞（hPDLFs）增殖的影响。

方法

改良组织块法培养hPDLFs，分别用CsA（10、100、200、400 ng/ml），Pg-LPS（10、100、1000 ng/ml），CsA（100 ng/ml）加Pg-LPS（100 ng/ml），CsA（100 ng/ml）加Pg-LPS（1000 ng/ml）作用于生长良好的第3 ～5 代细胞，MTT 法测其药物作用用下的增殖情况。

结果

细胞经上述浓度CsA 或Pg-LPS 作用后形态无明显变化，CsA 在100 ng/ml 浓度情况下，促细胞增殖作用最明显；高浓度Pg-LPS（1000 ng/ml）显著抑制细胞增殖，100 ng/ml CsA 能够显著降低Pg-LPS（1000 ng/ml）对细胞增殖的抑制效应；CsA（100 ng/ml）与Pg-LPS（100 ng/ml）联合作用于细胞时，对细胞的增殖无明显影响。

结论

在一定的浓度下，CsA 促PDLF 增殖作用明显；CsA 能对抗脂多糖（LPS）抑制细胞增殖的效应。

关键词: 环孢素A, 脂多糖, 牙周膜成纤维细胞

Objective

To evaluate the effects of cyclosporine A （CsA） and Porphyromonas gingivalis-lipopolysaccharide（Pg-LPS） on the proliferation of human periodontal ligament fibroblasts（hPDLFs） in vitro.

Methods

hPDLFs were cultured by using modified tissue block culture method. Cells of the 3^rd and 5^th passage were then incubated with CsA （10 ng/ml， 100 ng/mL，200 ng/ml， 400 ng/ml），Pg-LPS（10 ng/ml，100 ng/ml，1000 ng/ml），CsA（100 ng/ml）+Pg-LPS（100 ng/ml） and CsA （100 ng/ml） + Pg-LPS （1000 ng/ml）. Cell proliferation was assessed with MTT assay.

Results

No significant alterations of the cellular morphology could be observed after drug exposure. 100 ng/ml CsA enhanced hPDLFs proliferation；1000 ng/ml Pg-LPS inhibited hPDLFs proliferation， whereas 100 ng/ml CsA significantly decreased such inhibitory effect；hPDLFs proliferation was not significantly affected when incubated with CsA （100 ng/ml） plus Pg-LPS（100 ng/ml）.

Conclusion

At definite concentration，CsA could enhance hPDLFs proliferation，and decrease the inhibitory effect of Pg-LPS of high concentration.

Key words: Cyclosporine A, Porphyromonas gingivalis-lipopolysaccharide, Periodontal ligament fibroblast

图1 培养第5 天，牙周膜成纤维细胞从组织块周围游出（×400）

图2 CsA 作用3 d 后细胞形态（×100）

图3 LPS 作用3 d 后细胞形态（×100）

表1 PDLFs 经不同浓度CsA 作用下不同时间点的A 值（±s）

组别	加药前	加药后第2 天	加药后第3 天	加药后第5 天
CsA 溶剂组	0.0938±0.0111	0.2340±0.0139	0.3436±0.0299	0.6092±0.0309
CsA 10 ng / ml	0.0938±0.0111	0.2358±0.0173^a	0.3398±0.0252^a	0.6148±0.0205^a
CsA 100 ng / ml	0.0938±0.0111	0.2380±0.0208^a	0.3772±0.0228^b	0.6714±0.0295^b
CsA 200 ng / ml	0.0938±0.0111	0.2362±0.0215^a	0.3208±0.0161^a	0.6348±0.0295^a
CsA 400 ng / ml	0.0938±0.0111	0.2198±0.0215^a	0.3274±0.0353^a	0.5632±0.0344^b

表1 PDLFs 经不同浓度CsA 作用下不同时间点的A 值（±s）

组别	加药前	加药后第2 天	加药后第3 天	加药后第5 天
CsA 溶剂组	0.0938±0.0111	0.2340±0.0139	0.3436±0.0299	0.6092±0.0309
CsA 10 ng / ml	0.0938±0.0111	0.2358±0.0173^a	0.3398±0.0252^a	0.6148±0.0205^a
CsA 100 ng / ml	0.0938±0.0111	0.2380±0.0208^a	0.3772±0.0228^b	0.6714±0.0295^b
CsA 200 ng / ml	0.0938±0.0111	0.2362±0.0215^a	0.3208±0.0161^a	0.6348±0.0295^a
CsA 400 ng / ml	0.0938±0.0111	0.2198±0.0215^a	0.3274±0.0353^a	0.5632±0.0344^b

表2 PDLFs 经不同浓度LPS 作用下不同时间点的A 值（±s）

组别	加药前	加药后第2 天	加药后第3 天	加药后第5 天
单纯培养液组	0.0938±0.0111	0.2346±0.0289	0.3352±0.0310	0.6152±0.0274
LPS 10 ng / ml	0.0938±0.0111	0.2338±0.0263^a	0.3428±0.0164^a	0.6052±0.0386^a
LPS 100 ng / ml	0.0938±0.0111	0.2454±0.0331^a	0.3352±0.0226^a	0.5990±0.0113^a
LPS 1000 ng / ml	0.0938±0.0111	0.2112±0.0263^a	0.3002±0.0129^b	0.5846±0.0202^b

表2 PDLFs 经不同浓度LPS 作用下不同时间点的A 值（±s）

组别	加药前	加药后第2 天	加药后第3 天	加药后第5 天
单纯培养液组	0.0938±0.0111	0.2346±0.0289	0.3352±0.0310	0.6152±0.0274
LPS 10 ng / ml	0.0938±0.0111	0.2338±0.0263^a	0.3428±0.0164^a	0.6052±0.0386^a
LPS 100 ng / ml	0.0938±0.0111	0.2454±0.0331^a	0.3352±0.0226^a	0.5990±0.0113^a
LPS 1000 ng / ml	0.0938±0.0111	0.2112±0.0263^a	0.3002±0.0129^b	0.5846±0.0202^b

表3 PDLFs 经CSA 和LPS 联合作用下不同时间点的A 值（±s）

组别	加药前	加药后第2 天	加药后第3 天	加药后第5 天
单纯培养液组	0.0988±0.0083	0.2380±0.0166	0.3592±0.0321	0.6028±0.0223
CsA 加LPS 100 ng / ml	0.0988±0.0083	0.2310±0.0160^a	0.3630±0.0239^a	0.6106±0.0130^a
CsA 加LPS 1000 ng / ml	0.0988±0.0083	0.2256±0.0124^a	0.3464±0.0158^a	0.5762±0.0133^b

表3 PDLFs 经CSA 和LPS 联合作用下不同时间点的A 值（±s）

组别	加药前	加药后第2 天	加药后第3 天	加药后第5 天
单纯培养液组	0.0988±0.0083	0.2380±0.0166	0.3592±0.0321	0.6028±0.0223
CsA 加LPS 100 ng / ml	0.0988±0.0083	0.2310±0.0160^a	0.3630±0.0239^a	0.6106±0.0130^a
CsA 加LPS 1000 ng / ml	0.0988±0.0083	0.2256±0.0124^a	0.3464±0.0158^a	0.5762±0.0133^b

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Effects of cyclosporine A and porphyromonas gingivalis-lipopolysaccharide on proliferation of human periodontal ligament fibroblasts in vitro

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