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中华口腔医学研究杂志(电子版) ›› 2012, Vol. 6 ›› Issue (04) : 320 -323. doi: 10.3877/cma.j.issn.1674-1366.2012.04.003

基础研究

RNA干扰抑制人牙周韧带细胞S100A4基因的表达
赵彬1,(), 吕婧1, 李霞1   
  1. 1.030001 太原,山西医科大学口腔医院
  • 收稿日期:2012-03-14 出版日期:2012-08-01
  • 通信作者: 赵彬

Inhibition of gene expression of S100A4 in human periodontal ligament cells by RNA interference technology

Bin ZHAO1,(), Jing LV1, Xia LI1   

  1. 1.Department of Stomatology Shanxi Medical University,Taiyuan 030001, China
  • Received:2012-03-14 Published:2012-08-01
  • Corresponding author: Bin ZHAO
引用本文:

赵彬, 吕婧, 李霞. RNA干扰抑制人牙周韧带细胞S100A4基因的表达[J/OL]. 中华口腔医学研究杂志(电子版), 2012, 6(04): 320-323.

Bin ZHAO, Jing LV, Xia LI. Inhibition of gene expression of S100A4 in human periodontal ligament cells by RNA interference technology[J/OL]. Chinese Journal of Stomatological Research(Electronic Edition), 2012, 6(04): 320-323.

目的

研究RNA 干扰技术(RNAi)下调牙周韧带(PDL)细胞中钙结合蛋白S100A4 的表达,获得稳定的细胞单克隆,拟为后续试验提供细胞水平平台。

方法

利用RNAi 技术,针对人cDNA序列设计了S100A4 干扰序列及一个阴性对照,将其连接到RNA 干扰载体pGenesil-1 上,转染人PDL 细胞,通过反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot 检测有干扰序列的有效性。

结果

干扰片段转染72 h 后的mRNA 抑制效率为67.83%。

结论

RNAi 可以有效抑制PDL 细胞中S100A4的基因表达,为进一步研究S100A4 在PDL 细胞中的功能提供新的思路。

Objective

Observation of using RNA interference technology by periodontal ligament(PDL) cells calcium binding protein S100A4 expression, to obtain stable cell monoclonal, for follow-up tests provide cellular level platform.

Methods

Used the technology of RNA interference (RNAi) to cut down S100A4 expression, targeting the coding sequence of human S100A4 gene and a negative control were designed. Then they were ligated into the vector of pGenesil-1 respectively,and were transfected into PDL cells. By the means of RT-PCR and Western blot,we could examine their suppression.

Result

The results showed that the interference effects of the RNAi expression vectors were 67.83%.

Conclusion

RNA interference can be effectively suppressed in periodontal ligament cells and S100A4 gene expression. This study provides a new means for investigating the effects of S100A4 in PDL cells.

图1 RT-PCR 检测S100A4 mRNA 水平的表达 A. 阴性对照序列的siRNA 质粒表达载体在24、48、72、96 h 对PDL 细胞S100A4 mRNA 表达的影响; B. 含有S100A4 干扰序列的siRNA质粒分别转染24、48、72、96 h 时对PDL 细胞S100A4 mRNA 表达的影响
图2 Western blot 检测S100A4 蛋白的表达 A. C 组(正常对照组)S100A4 蛋白表达水平,S100A4 组(实验组)siRNA 质粒转染PDL 细胞72 h 后S100A4 蛋白表达量与正常对照组比水平明显下降; B. 实验组在转染72 h 时蛋白抑制率约为75.28%,实验组与对照组之间差异具有统计学意义(P<0.05)
1
Lekic P, McCulloch CA. Periodontal ligament cell populations:the central role of fibroblasts in creating a unique tissue. Anat Rec, 1996,245(2):327-341.
2
Murakami Y, Kojima T, Nagasawa T, et al. Novel isolation of alkaline phosphatase-positive subpopulation from periodontal ligament fibroblasts. J Periodontol, 2003,74(6):780-786.
3
Schäfer BW, Wicki R, Engelkamp D, et al. Isolation of a YAC clone covering a cluster of nine S100 genes on human chromosome 1q21: rationale for a new nomenclature of the S100 calcium-binding protein family.Genomics,1995,25(3):638-643.
4
Strutz F, Okada H, Lo CW, et al. Identification and characterization of a fibroblast marker: FSP1. Cell Biol, 1995,130(2):393-405.
5
Duarte WR, Shibata T, Takenaga K, et al. S100A4: a novel negative regulator of mineralization and osteoblast differentiation.J Bone Miner Res, 2003,18(3):493-501.
6
Fire A, Xu S, Montgomery MK, et al. Potent and specific genetic interference by double-stranded RNA in Caenorhabditis elegans. Nature, 1998,391(6669):806-811.
7
Elbashir SM, Harborth J, Lendeckel W, et al. Duplexes of 21-nucleotide RNAs mediate RNA interference in cultured mammalian cells. Nature, 2001,411(6836):494-498.
[1] 林桦, 秦超, 骆宁, 刘宏伟, 于泳浩. 烧伤大鼠肝组织关键基因的筛选[J/OL]. 中华危重症医学杂志(电子版), 2023, 16(06): 448-452.
[2] 杜娟, 宋波, 颜晓明, 牛佳鸣, 林元龙, 陈晓红, 李锦, 梁晗, 张铮, 李宇欧, 王福祥, 邵冰. 外周血单个核细胞内人类免疫缺陷病毒DNA和RNA定量对病毒转录活性的区分[J/OL]. 中华实验和临床感染病杂志(电子版), 2022, 16(03): 165-171.
[3] 张琳, 李婷. CRIP1在胃癌中的表达及与临床病理指标和预后的关系研究[J/OL]. 中华普外科手术学杂志(电子版), 2024, 18(02): 171-175.
[4] 刘荣强, 郑世扬, 代天星, 邓铭彬, 林国桢, 周朝荣, 汪国营. 利用TCGA数据库分析AKR1B10在肝癌中的表达及临床意义[J/OL]. 中华普外科手术学杂志(电子版), 2021, 15(04): 380-383.
[5] 孙睿, 梁辉, 张颖, 邓琼, 胡七一, 张圣平, 张建文, 王铸. 基因芯片分析孤儿核受体NURR1上调表达对前列腺癌LNCaP细胞基因表达谱的影响[J/OL]. 中华腔镜泌尿外科杂志(电子版), 2022, 16(01): 81-85.
[6] 邱凌霄, 王创业, 卿斌, 刘锦程, 张鑫烨, 武文娟, 邢德冰, 郭亮, 徐智, 王斌. 基于转录组学筛选特发性肺纤维化的枢纽基因和信号通路[J/OL]. 中华肺部疾病杂志(电子版), 2024, 17(02): 212-217.
[7] 王庭宇, 邵联波, 刘珊, 沈振亚. Stanford A 型主动脉夹层相关基因KIF20A 的共表达网络构建及作用靶点分析[J/OL]. 中华细胞与干细胞杂志(电子版), 2024, 14(05): 303-312.
[8] 范家铭, 杨秭莹, 冯振辉, 陈一欢, 王雨桐, 沈振亚. 影响扩张型心肌病干细胞移植疗效的差异miRNA表达分析[J/OL]. 中华细胞与干细胞杂志(电子版), 2023, 13(05): 288-298.
[9] 陈俊杰, 郭浩然, 施波, 陈国梁, 邰清亮, 侍新宇, 姚慧慧, 米秀伟, 王索, 孙金兵, 周迪远, 顾闻, 何宋兵. 基于TCGA和GEO数据挖掘分析NAT1在结肠癌中的表达及预后意义[J/OL]. 中华结直肠疾病电子杂志, 2022, 11(05): 399-408.
[10] 李飞, 秦强强, 谷战峰, 张天祥, 申思, 周丽, 张乐莎. 基于生物信息学的结直肠癌枢纽基因与预后相关基因筛选[J/OL]. 中华结直肠疾病电子杂志, 2021, 10(05): 497-504.
[11] 李京, 牛博, 刘晓蓓, 魏新雪, 黄荣. circ-SESN2 沉默靶向调控miRNA-23a-5p/ULK1 在神经细胞氧化应激损伤中的作用机制研究[J/OL]. 中华神经创伤外科电子杂志, 2024, 10(05): 263-272.
[12] 许航, 崔宇韬, 任广凯, 刘贺, 王雁冰, 彭传刚, 吴丹凯. 骨质疏松症关键基因的筛选及生物信息学分析[J/OL]. 中华老年骨科与康复电子杂志, 2023, 09(01): 18-22.
[13] 魏群, 赵杭, 赵静, 吴永强, 任静, 侯慧玉, 杭景仙, 宋艳梅, 张玮. 脑卒中和骨质疏松症相关关键基因的生物信息学分析[J/OL]. 中华老年骨科与康复电子杂志, 2021, 07(06): 364-371.
[14] 唐晓琳, 孔霞, 王槐高, 李蓉. miR-3182调控LPPR4表达并抑制成骨细胞分化成熟的研究[J/OL]. 中华老年骨科与康复电子杂志, 2021, 07(03): 176-180.
[15] 王飞飞, 王光林, 孟泽松, 李保坤, 曹龙飞, 张娟, 周超熙, 丁源一, 王贵英. 敲低IMPDH1对结肠癌SW480、HT29细胞生物功能的影响[J/OL]. 中华临床医师杂志(电子版), 2023, 17(08): 884-890.
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