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中华口腔医学研究杂志(电子版)

中华口腔医学研究杂志(电子版) ›› 2009, Vol. 3 ›› Issue (02) : 159 -164. doi: 10.3877/cma.j.issn.1674-1366.2009-02-007

基础研究

实时荧光定量PCR 法测定成釉细胞瘤中肿瘤坏死因子基因的表达
蒋立坚1, 陈小华2, 吴新中1, 蔡道章3,†(), 李卫国1, 王丽娟1   
  1. 1.510630 广州，中山大学附属第三医院口腔科
    2.510630 广州，中山大学光华口腔医学院·附属口腔医院·口腔医学研究所
    3.510630 广州，中山大学附属第三医院骨科
  • 收稿日期:2008-07-04 出版日期:2009-04-01
  • 通信作者: 蔡道章
  • 基金资助:
    广东省科技厅资助项目（2007B031003003）

Semi-quantitative detection of TNF mRNA in ameloblastoma by RT-PCR

Li-jian JIANG1, Xiao-hua CHEN1, Xin-zhong WU1, Dao-zhang CAI1,†(), Wei-guo LI1, Li-juan WANG1   

  1. 1.Department of Oral and Maxillofacial Surgery，The Third Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University，Guangzhou 510630， China
  • Received:2008-07-04 Published:2009-04-01
  • Corresponding author: Dao-zhang CAI
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引用本文：

蒋立坚, 陈小华, 吴新中, 蔡道章, 李卫国, 王丽娟. 实时荧光定量PCR 法测定成釉细胞瘤中肿瘤坏死因子基因的表达[J/OL]. 中华口腔医学研究杂志(电子版), 2009, 3(02): 159-164.

Li-jian JIANG, Xiao-hua CHEN, Xin-zhong WU, Dao-zhang CAI, Wei-guo LI, Li-juan WANG. Semi-quantitative detection of TNF mRNA in ameloblastoma by RT-PCR[J/OL]. Chinese Journal of Stomatological Research(Electronic Edition), 2009, 3(02): 159-164.

目的

探讨肿瘤坏死因子（TNF）基因mRNA 在成釉细胞瘤（AM）中的表达水平及其与AM 的相关关系。

方法

用10 对临床配对AM 和正常牙囊组织，提取和纯化mRNA，逆转录成cDNA，在测定最佳反应条件后，采用实时荧光定量PCR 技术验证TNF 基因的表达情况，结合内参照3-磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）管家基因进行相对定量分析。

结果

采用实时荧光定量PCR 技术完成10 对配对组织中TNF 基因的检测，得到TNF 基因mRNA 在AM和牙囊组织的相对定量表达值分别（1.709±0.655）、（0.873±0.039），经检验其表达水平的差异具有统计学意义（P=0.001），TNF 在9 对临床配对标本中呈高表达。

结论

TNF 可能是与AM 密切相关的基因。

关键词: 成釉细胞瘤, 牙源性肿瘤, 逆转录聚合酶链反应, 基因

Objectives

To detect the expression of TNF in ameloblastoma and explore its correlation with ameloblastoma.

Methods

The total RNAs were isolated from tissues of 10 ameloblastoma and 10 paired normal odontogenic cysts respectively.mRNA was purified by oligotex.Both mRNAs from two kinds of tissues were reversely transcribed to cDNAs.mRNA expression of TNF were evaluated by real time quantitative polymerase chain reaction （RT-PCR）and quantified according to an internal control GAPDH.

Results

The relative quantitative expression of TNF mRNA were 1.709±0.655 and 0.873±0.039 respectively.The over expression of TNF was measured in 9 cases of ameloblastoma.

Conclusion

TNF maybe genes closely related to ameloblastoma.

Key words: Ameloblastoma, Odontogenic tumor, Reverse transcriptase polymerase chain reaction, Genes
表1 成釉细胞瘤组织候选基因和内参的扩增引物序列和产物大小
基因名称 引物方向 引物序列 引物长度 扩增长度
GAPDH GAPDH-F TTCGACAGTCAGCCGCATCTT 21 000 90 000
GAPDH-R ATCCGTTGACTCCGACCTTCA 21 000
TNF TNF-F GAGAAGATTCGTGGGCTGAT 20 000 169 000
TNF-R CCTTGTTCTTGTCCTGTGGG 20 000
图1 基因扩增后得到的cDNA 样品
图2 TNF 溶解曲线图
图3 TNF 扩增曲线图
图4 TNF 基因在10 对配对临床标本中，肿瘤相对于正常牙囊组织的表达倍数改变情况 9 对标本表达上升，1 对无差异
表2 TNF 基因mRNA 在成釉细胞瘤和牙囊组织的相对定量表达值（±s）
组织 ΔCT 值 P
成釉细胞瘤 1.709±0.655 0.001
牙囊组织 0.873±0.039
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